• 我要登录|
  • 免费注册
    |
  • 我的丁香通
    • 企业机构:
    • 成为企业机构
    • 个人用户:
    • 个人中心
  • 移动端
    移动端
丁香通 logo丁香实验_LOGO
搜实验

    大家都在搜

      大家都在搜

        0 人通过求购买到了急需的产品
        免费发布求购
        发布求购

        如何确定蛋白是否正确折叠

        相关实验:蛋白质免疫印迹(Western Blot,WB)

        user-title

        wj0914

        最近在做一个小分子多肽(4KD,含4个二硫键),采用的是构建到pet32a(含trx标签),然后BL21(DE3),37℃诱导5h得到融合蛋白(大约22KD)。现在遇到了以下问题

        1、融合蛋白过分子筛峰(superdex200柱)很宽(5ml以上了),而且量少的时候发现其实是两个峰(一个14ml左右,一个17左右)重叠在一起了,所以导致峰宽。洗镍柱的咪唑用到了100mM,也并没有改善,两个峰几乎等比降低,低温诱导也是一样的。取两个峰跑胶,发现后面那个峰和前面峰条带几乎一样,只是多了一条分子量低了3-4KD的带(带相对来说较浅),想请问一下这两个峰是否是由于二硫键的不同折叠状态导致的?如果是的话,如何判断哪个峰才是正确折叠的呢?以及如何改善这种情况?

        2、蛋白二硫键不正确折叠会影响后续其与另一个蛋白的结合吗?

        图片描述图片描述图片描述

        wx-share
        分享

        3 个回答

        user-title

        bamboopiggy

        有帮助

        你用的是原核表达系统,虽然原核系统的表达效率易于优化和调整,表达量高。但是当用于表达真核外源基因时,由于不同的蛋白质折叠和糖链修饰,其应用受到限制。所以我觉得你可以考虑换个真核表达系统试试

        user-title

        Eason老歌迷

        有帮助

        蛋白二硫键不正确折叠肯定会影响后续其与另一个蛋白的结合。即便是蛋白质氨基酸支架的微小改变,也会引发错误折叠并且妨碍蛋白质功能或引发疾病。

        我记得中科院有一个项目就是如何确定蛋白是否正确折叠,你可以查查看。

        user-title

        天一湖医者

        有帮助

        第二个问题。蛋白二硫键不正确折叠会影响后续其与另一个蛋白的结合吗?

        对蛋白质的高级结构会有影响的。如果这个蛋白质在肽链之间或肽链之内由二硫键连接成二级以上的高级结构的话,二硫键被破坏的话将影响蛋白质的结构。

        ad image
        提问
        扫一扫
        丁香实验小程序二维码
        实验小助手
        丁香实验公众号二维码
        扫码领资料
        反馈
        TOP
        打开小程序