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实验问答

28,771,175 科研人在看

问我细胞传代不需要离心，只需要吹打成细胞悬液之后弃去部分液体，补加培养液就可以，操作很简单我步骤都是对的但是为什么我细胞状态一直？

Eason老歌迷

可能有几个原因，一个是你的传代时机选的不好，容易细胞老化。二是你的培养基缺少某些成分，或者是ph值不对。或者是你的胰酶消化过度。

3 回答1130 围观

问什么情况下要做ChIP-seq，什么情况下做EMSA？两者有何区别？

bamboopiggy

chip-seq得到的数据比较多，emsa可以对chip-seq找到的序列进行验证，最好两个都做。

3 回答2362 围观

问为什么瓶装PBS那么贵？

bamboopiggy

瓶装的要在无菌环境中生产，还要罐装，当然贵啊。你买的粉，自己配，如果你算算，会发现，不买粉，直接自己称量各组分来配的话，更便宜。

4 回答752 围观

问elispot是不是要检测TB.细胞，需要分离培养淋巴细胞么？这个实验的前期基础怎么做呢

天一湖医者

elispot检测TB.细胞需要分离培养淋巴细胞。ELISPOT检测的是可释放细胞因子的活化T淋巴细胞的数目。ELISPOT方法的基本原理一样，但仍然会有一些变化，包括效应细胞的种类，可以是外周血T淋巴细胞，也可以是体外培养的T细胞。抗原刺激物可以是肽或者蛋白质，抗原呈递细胞有外周血单核细胞、树突状细胞或者肿瘤细胞系，检测的指标可以是各种细胞因子或者颗粒酶B等。

2 回答558 围观

问最近养细胞总是出现霉菌污染，换了培养基，重新复苏还是会有，大概是什么原因呢？

秋秋欣欣

环境有问题，孵箱以及培养房都灭菌

5 回答614 围观

问做小干扰之后跑pcr，这个结果意思是没干扰成功么

秋秋欣欣

没差异就是没干扰成功啊，干扰成功表达量会下降

4 回答517 围观

问血液流变学检测哪一种方法更合理？

Eason老歌迷

血液黏度是血液最基本的流变特性。血液黏度测定包括全血黏度和血浆黏度测定。血液黏度的单位以 mPa·s表示。血液黏度测定的方法主要分两大类，一类是毛细管黏度测定法，另一类是旋转式黏度测定法。我觉得第一类方法更合理。

2 回答689 围观

问QPCR实验平行孔Ct值差别太大是什么原因？要怎样进行调整？平行孔之间Ct值要保证偏差在多少之间才可以，有标准么？

Eason老歌迷

ct值差别大，可能是模板浓度低或存在PCR抑制物，或者是你的pcr扩增效率低。Ct值的范围为15-35。Ct值小于15，认为扩增在基线期范围内，未达到荧光阈值。理想情况下，Ct值与模板起始拷贝数的对数存在线性关系，也就是标准曲线。通过标准曲线，扩增效率为100%时，计算出基因单个拷贝数定量的Ct值在35左右，若大于35，理论上模板起始拷贝数小于1，可认为无意义。

5 回答1299 围观

问原核表达蛋白诱导问题？

申东熙老伯

如果未+IPTG与+IPTG组诱导结果没有差别的话，很有可能蛋白直接没有诱导出来，换个载体重新构建质粒导入新的感受态细胞试着再诱导一下看看，诱导温度和转速还有时间一般不会对诱导结果造成太大差异。

4 回答1506 围观

问关于RNA提取的问题？

bamboopiggy

跑胶的结果，准确，胶回收不同长度的片段，有不同程度的损耗。

3 回答919 围观

问动物实验给药浓度体积配置

bamboopiggy

0.2ml/10g则相当于20ml/kg，药物浓度为：20mg/ml. 但是灌胃的药，你最好配个高浓度的饿母液，然后现用现稀释。一般小鼠给药前不用禁食，但是你最好规律时间给药（如上午都上午，下午都下午），从而达到合适的药物浓度。

4 回答7767 围观

问为什么显影时除了目的蛋白，背景中的其他蛋白也有些显影？

balalaLy

一个可能是抗体浓度高，适当降低一抗浓度，另一个可能是抗体用的次数多，重新配一支实在不行就得重新买抗体了

5 回答398 围观

问提蛋白的时候ripa和pmsf 的比例弄错了，弄成了10:1，

inventbiotech

没啥影响，就是有点浪费蛋白酶抑制剂

4 回答2853 围观

问条件培养基的制备过程中的坑！

bamboopiggy

1000rpm，10min或者是3000rpm，5min就可以。)后0.22um滤器过滤，这些的目的都是去除培养基中的细胞。不需要测定营养物质的消耗，条件培养基，主要是收集细胞分泌的促增殖的物质，来促进细胞增殖的。

2 回答2819 围观

问实验技术丨求助考马斯亮蓝染胶结果疑问

inventbiotech

蛋白降解不像，降解成弥散装。70kd附近条带跟血清白蛋白很像，如果是组织样本可能是血清污染，如果是细胞样本，可能是培养基血清污染，对样本进行清洗应该可以去除污染。最下方是没有区分开的条带，可以用梯度胶进行分离，效果会好一些

3 回答858 围观

问WB为什么这么难做，一时有条带，一时没有

inventbiotech

WB其实也是一个很灵敏的蛋白检测技术。蛋白样品提取时产生的偏差会导致条带一时有一时无，尤其时目前大家常用RIPA来进行总蛋白的提取，当目标蛋白处于细胞核，细胞器，细胞膜上，这些蛋白在RIPA提取总蛋白时，细胞核因为裂解的不充分核不破或者是裂解特别大染色质打开样品粘稠核内一些蛋白依然不能释放，细胞器和细胞膜上的蛋白因为是膜蛋白脂质层包裹在RIPA裂解液中溶解度有限，尤其是跨膜蛋白这种问题就更为突出，

4 回答774 围观

问WB曝光后发现无目标条带，但内参条带比较好的原因有哪些

inventbiotech

这种情况可以说明WB操作没问题，需要考虑目标蛋白一抗，目标蛋白如果是外源性表达，需要找一下表达条件，载体。内源性表达，就需要考虑蛋白提取的时候是不是提取出来了，尤其是表达在细胞核细胞器和细胞质膜上的蛋白。提取时如果是用RIPA提取的，很容易将这些部位的蛋白丢失在RIPA的不可溶性组分里。还有一种情况就是这个目标蛋白表达丰度特别低，需要针对于所在部位进行富集再行WB检测

4 回答894 围观

问用GFP的抗体去做磷酸化蛋白的wb，会出现两条带吗

bamboopiggy

会出现两条带，磷酸化的和total的。

3 回答820 围观

问求助大家做WB电泳液和电转液重复使用几次

inventbiotech

电泳液内槽每次都是新的，外槽2-3次，电转液重复用不好吧

4 回答1846 围观

问查找相关序列求助！！！

bamboopiggy

找到那些代谢酶的基因序列，然后跟你的基因组DNA进行比对就可以

2 回答1385 围观

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