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实验问答

28,112,411 科研人在看

问ChIP-nexus和ChIP-exo和普通的ChIP有什么不一样？

bamboopiggy

CHIP-nexus 是能够在基因组中精确定位转录因子结合位点的新技术，该技术分辨率很高。CHIP-exo（ChIP外切酶），应用于各种蛋白因子结合在基因组上结合位置的鉴定，以达到碱基对水平的分辨率。c

3 回答2124 围观

问什么情况下要做ChIP-seq，什么情况下做EMSA？两者有何区别？

bamboopiggy

chip-seq得到的数据比较多，emsa可以对chip-seq找到的序列进行验证，最好两个都做。

3 回答2338 围观

问为什么瓶装PBS那么贵？

bamboopiggy

瓶装的要在无菌环境中生产，还要罐装，当然贵啊。你买的粉，自己配，如果你算算，会发现，不买粉，直接自己称量各组分来配的话，更便宜。

4 回答701 围观

问如何选择合适的elispot试剂盒，要做疫苗抗体效价检测

天一湖医者

1、查找待测样本的蛋白浓度　可以通过NCBI的文献，给出的蛋白表达量参考值来比较elisa试剂盒给出的样本值与报道值是否一致。2、试剂盒的应用种属、检测样本的种类　　除试剂盒特别说明外，一般不同种属不能通用。常见待测样本种类有：血清和血浆（不同抗凝剂），细胞上清，和细胞裂解液，试剂盒中不同样本的稀释液不混用。3、•.检测范围： •建立线性范围：需测定9-11个浓度水平，每个浓度水平重复测定3-4

2 回答697 围观

问elispot是不是要检测TB.细胞，需要分离培养淋巴细胞么？这个实验的前期基础怎么做呢

天一湖医者

elispot检测TB.细胞需要分离培养淋巴细胞。ELISPOT检测的是可释放细胞因子的活化T淋巴细胞的数目。ELISPOT方法的基本原理一样，但仍然会有一些变化，包括效应细胞的种类，可以是外周血T淋巴细胞，也可以是体外培养的T细胞。抗原刺激物可以是肽或者蛋白质，抗原呈递细胞有外周血单核细胞、树突状细胞或者肿瘤细胞系，检测的指标可以是各种细胞因子或者颗粒酶B等。

2 回答551 围观

问最近养细胞总是出现霉菌污染，换了培养基，重新复苏还是会有，大概是什么原因呢？

秋秋欣欣

环境有问题，孵箱以及培养房都灭菌

5 回答603 围观

问做小干扰之后跑pcr，这个结果意思是没干扰成功么

秋秋欣欣

没差异就是没干扰成功啊，干扰成功表达量会下降

4 回答505 围观

问血液流变学检测哪一种方法更合理？

Eason老歌迷

血液黏度是血液最基本的流变特性。血液黏度测定包括全血黏度和血浆黏度测定。血液黏度的单位以 mPa·s表示。血液黏度测定的方法主要分两大类，一类是毛细管黏度测定法，另一类是旋转式黏度测定法。我觉得第一类方法更合理。

2 回答675 围观

问血液流变学检测怎么保证准确性？

Eason老歌迷

为保证检测的准确性，应特别注意采血时间及摄食时间。在采血方式上，也应注意避免造成血粘度误差的因素，如采血时压脉带的压力大小、血管受压时间长短等均对血粘度检测结果有所影响，血管在较高的压力下受阻时间长，则血液会有所浓缩。抗凝剂的正确使用也是保证检测准确性的关键之一。因草酸盐或枸橼酸钠等抗凝剂可引起细胞的形态改变、影响红细胞的聚集性和变性能力，导致血粘度检测不准确。

2 回答636 围观

问RT-PCR的相关问题？

bamboopiggy

只合成第一链就可以做RT-PCR，随着扩增过程，会形成第二链的。

3 回答779 围观

问QPCR实验平行孔Ct值差别太大是什么原因？要怎样进行调整？平行孔之间Ct值要保证偏差在多少之间才可以，有标准么？

Eason老歌迷

ct值差别大，可能是模板浓度低或存在PCR抑制物，或者是你的pcr扩增效率低。Ct值的范围为15-35。Ct值小于15，认为扩增在基线期范围内，未达到荧光阈值。理想情况下，Ct值与模板起始拷贝数的对数存在线性关系，也就是标准曲线。通过标准曲线，扩增效率为100%时，计算出基因单个拷贝数定量的Ct值在35左右，若大于35，理论上模板起始拷贝数小于1，可认为无意义。

5 回答1263 围观

问原核表达蛋白诱导问题？

申东熙老伯

如果未+IPTG与+IPTG组诱导结果没有差别的话，很有可能蛋白直接没有诱导出来，换个载体重新构建质粒导入新的感受态细胞试着再诱导一下看看，诱导温度和转速还有时间一般不会对诱导结果造成太大差异。

4 回答1487 围观

问关于RNA提取的问题？

bamboopiggy

跑胶的结果，准确，胶回收不同长度的片段，有不同程度的损耗。

3 回答900 围观

问动物实验给药浓度体积配置

bamboopiggy

0.2ml/10g则相当于20ml/kg，药物浓度为：20mg/ml. 但是灌胃的药，你最好配个高浓度的饿母液，然后现用现稀释。一般小鼠给药前不用禁食，但是你最好规律时间给药（如上午都上午，下午都下午），从而达到合适的药物浓度。

4 回答7657 围观

问提蛋白的时候ripa和pmsf 的比例弄错了，弄成了10:1，

inventbiotech

没啥影响，就是有点浪费蛋白酶抑制剂

4 回答2791 围观

问条件培养基的制备过程中的坑！

bamboopiggy

1000rpm，10min或者是3000rpm，5min就可以。)后0.22um滤器过滤，这些的目的都是去除培养基中的细胞。不需要测定营养物质的消耗，条件培养基，主要是收集细胞分泌的促增殖的物质，来促进细胞增殖的。

2 回答2729 围观

问实验技术丨求助考马斯亮蓝染胶结果疑问

inventbiotech

蛋白降解不像，降解成弥散装。70kd附近条带跟血清白蛋白很像，如果是组织样本可能是血清污染，如果是细胞样本，可能是培养基血清污染，对样本进行清洗应该可以去除污染。最下方是没有区分开的条带，可以用梯度胶进行分离，效果会好一些

3 回答844 围观

问求助|TLR抑制剂（TAK-242）和激动剂（CRX-527）的用法

天一湖医者

TLR抑制剂（TAK-242）常用剂量为0.5mg/kg。激动剂（CRX-527）常用剂量为5-10ug/kg

2 回答769 围观

问用GFP的抗体去做磷酸化蛋白的wb，会出现两条带吗

bamboopiggy

会出现两条带，磷酸化的和total的。

3 回答787 围观

问查找相关序列求助！！！

bamboopiggy

找到那些代谢酶的基因序列，然后跟你的基因组DNA进行比对就可以

2 回答1284 围观

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