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各位大佬wb条带宽窄不一样什么原因
林夕娜娜
胶的问题,没有凝好,或者是没有混匀
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问
请问各位大神,磷酸化pi3k(分子量85)跑出来泳道背景很深
bamboopiggy
你试试用5%的脱脂牛奶封闭看看,可能会好一些
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问
请问hepG2能长满?
秋秋欣欣
HepG2可以长满啊,成团估计是你传代的时候没要吹散吧
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问
用本源抗体时,如果杂带特别多,主带又不特别浓,怎么确认目的条带?根据大小盲猜的么?如果那个位置靠近的上下也都有条带呢?
Eason老歌迷
大部分抗体的检测结果与理论分子量比较相近,检测结果误差在10-15%以内都可以认为是正确条带。
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问
请教,蛋白条带出现杂带,是抗体
Eason老歌迷
可能是你的抗体特异性不高。你的蛋白有没有降解,你的目的蛋白会不会形成二聚体。封闭时间是不是太短。
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问
自制溶液有效期如何确定?
天一湖医者
在实验阶段,配制一定浓度的溶液或者试剂作为受试液,分装后保存于适宜的环境中;按一定的时间间隔(日、周或月),取部分分装后标准溶液,以新配制标准溶液(X0)为标准对其进行测定,得到不同保存期的标准溶液浓度值(Xi)。计算X0与Xi相比较的En值,依据En值及Xi对应的保存期确定该标准溶液的有效期。可接受的En值(也称E比率)应在-1到+1之间,即En≤1(越接近零越好);2准确称取0.05000g三
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问
好久没有科研了,问个小白问题,wb抗体哪家比较好的?一抗二抗,准备实验的。
养点鱼吃火锅
一般还是选择进口品牌,写到文章里受认可度更高,也不是说国产抗体都不好,也有质优价廉的国产抗体。进口品牌比如abcam,CST,thermo等。进口的也有可能效果不好,需要试一下。
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做WB时,抗体非特异性结合,与哪些因素有关?
Eason老歌迷
一个是抗体浓度问题。一个是抗体和fc受体结合。
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问
westernblot为什么条带有尾影 怎么处理?
Eason老歌迷
可能是你的一抗浓度太高了,你把一抗浓度稀释完在看。
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问
跑蛋白最后显影的时候膜上有一些斑点,不是很干净是为什么?怎么解决?
Eason老歌迷
你配置封闭液的时候,取上清,别取沉淀。还有就是封闭时间稍微延长。还有你的抗体浓度也可以稀释来看看
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问
请问转膜后封闭使用快速封闭液还是自行配置的5%脱脂奶粉效果好呢?
ZMY_foep
5%的脱脂奶粉好!也可以用牛血清蛋白
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问
qPCR的CT值标准
bamboopiggy
正常值范围是20-35吧,如果实在不行,预实验可以设置两个复孔,复孔间差值不要超过0.5
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问
蛋白质免疫印迹实验中wb转膜问题
Eason老歌迷
转膜的时候可以切膜,我们都是切开的。当然你也可以不切,这样的话,你就是一起孵抗体,这样的话就是比较费抗体。你的背景比较脏,建议你增加封闭时间,或者是你封闭液取上清,别混沉淀。
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问
蛋白质的毛细管电泳分析实验中,采用整个毛细管进样技术,样品可以浓缩多少倍?
Eason老歌迷
要是70%,可以浓缩差不多100倍吧。那整个的话可以浓缩130倍左右。
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问
IP后的蛋白洗脱液有60ul,要跑WB的话用多少合适?
balalaLy
比如我用2个100cm皿的细胞拉的蛋白可以按照10ul左右的上样量跑,大多数蛋白都可以跑出来
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问
WB实验时目的蛋白信号弱怎么办?
林夕娜娜
1.加大上样量2.使用高灵敏度的发光液。
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问
买的抗体,说明书里图片显示目的条带只有一条,而自己做wb,却有多条带,什么原因呢?
balalaLy
有些时候是会这样,要调整一下抗体的浓度、稀释液、还有孵育时间。
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问
用BCA法测蛋白浓度的时候总会存在调平失败的状况,有的时候甚至不如不调,有什么小技巧让调平更稳一些吗
balalaLy
如果组间蛋白量差异比较大的前提下用BCA法定量是会有比较大的误差,所以尽量取细胞数差不多的,或者组织重量相近的。
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问
WB转膜用的膜有什么差别吗?实验室有两种,一个孔径大于20um,一个小于20um,但是有人说可以通用
秋秋欣欣
主要是看你的蛋白大小,如果你的蛋白很小最好用小孔径的,如果蛋白较大则需要用大孔径的膜
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问
在做血液流变学检测实验时,实验废料撒漏后如何处置?
Jason萱
所有的传染性废弃物在处理前需经高压消毒。待消毒物品应放置在安全的容器内,至少在121℃的条件下高压消毒30分钟,然后进行焚烧处理。但若无法进行则必须采用其他合适的方法,如用漂白剂或10%次氯酸钠溶液进行消毒。
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