wb中的磷酸化蛋白要怎么跑，有没有什么特殊技巧，能跑的好看

磷酸化的蛋白跑wb，建议每次都用新鲜的抗体原液，因为它特别容易降解。而且你提蛋白也要加磷酸化抑制剂。

磷酸化的蛋白封闭的时候最好用5%BSA

磷酸化蛋白WB，其实主要还是在于样品制备，样品取样时间，磷酸化蛋白是蛋白处于磷酸激酶启动后的状态，磷酸化蛋白且容易去磷酸化，所以提取时需要加入磷酸酶抑制剂防止其发生去磷酸化。提取蛋白要快，蛋白样品提取完成后，测浓度，加上样缓冲液煮样放-80备用。提取到蛋白是关键，柱式法蛋白提取方法，1分钟可以完成蛋白的提取，防止蛋白提取过程中的降解，磷酸化蛋白去磷酸化

收样的lysis中加点磷酸酶抑制剂，洗膜用tbst，会好一些。

磷酸化的蛋白建议每次都用新鲜的抗体原液，将条带剪下来后用杂交袋塑封 好，按 1：1000 的比例加入抗体原液孵育，再这种情况下，100ul 的抗体也是能用很久的，所以尽量每次都用新的抗体。