求助wb不出条带

我们用的都是实验专用的脱脂牛奶，还有二抗可以降低些，不知道你的推荐浓度是多少，二抗我都是1：10000

没有出条带，常见的原因有两个：一是目的蛋白表达量过低，无法达到 WB 检测下限；二是在样品制备过程中，目的蛋白发生了丢失。

有几个问题。你的背景太脏，你可以换一个封闭液试一试，或者是封闭时间延长。你的二抗可以在稀释一下，试试看效果。

一抗稀释浓度再调低点，封闭5%牛奶1.5个小时够了。可以1：2000或者1：3000稀释一抗，4℃孵育过夜。