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科研学霸天团,48小时有问必答
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膜蛋白IP裂解液及裂解方式是什么?
天一湖医者
通过破坏细胞膜和蛋白间的相互作用等方式裂解组织或细胞;
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问
激光捕获显微切割应该用什么样的耗材?和普通冰冻切片的材料一样吗?
府宅
适用于石蜡切片、冰冻切片、细胞涂片、培养活细胞和染色体样本,和普通冰冻切片的材料大致一样
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问
小分子量的蛋白 用15%的胶可以分出来吗?条带大小7KD
秋秋欣欣
15%的胶最佳分离范围为10-40kda, 应该也可以的
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问
封闭之后,需要洗膜吗?
天一湖医者
需要,封闭完成后要进行洗膜,以去除膜上未结合的封闭试剂
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问
怎么降低蛋白膜的背景?
天一湖医者
孵育时间短一点,洗膜时间长一点试试,关键是洗膜时间加长。
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问
处理组和对照组内参基因的CT值差异是多少是比较合理的。如果扩增曲线刨出来不是很好看,平台期也是弯弯曲曲的波浪线,结果可以用吗?
天一湖医者
处理组和对照组内参基因的CT值差异在10以内是比较合理的。
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问
蛋白样品在冰箱零下20度最多可以保存多久?
天一湖医者
蛋白样品在冰箱零下20度最多可以保存一个月左右。
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问
请问细胞饥饿处理,通过酶联免疫检测不同时间的酪蛋白,若酪蛋白含量最低时是饥饿点吗
Eason老歌迷
是的。酪蛋白含量最低时是饥饿点。
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问
求助论文中转基因小鼠表述的意思
Eason老歌迷
转基因鼠是除了固有的基因组外,小鼠体内还有一个或以上外来转入基因,它能表达和体现转入基因的功能,实现特定目的。转基因是用DNA重组技术克隆的基因,通过一定的方式导入细胞或个体。通过转基因可对特定基因进行表达、修饰或删除。
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问
wb目的蛋白不出条带
天一湖医者
没有出现目的条带,其常见的原因有两个:一是目的蛋白表达量过低,无法达到 WB 检测下限;二是在样品制备过程中,目的蛋白发生了丢失。
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问
溶液配制
Eason老歌迷
使50ml 0.1mol/L三羟甲基氨基甲烷(Tris)溶液与x ml 0.1mol/L 盐酸混匀后,加水稀释至100ml即可配置成功。
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问
【求助】PC12细胞钙离子通道电流检测
Eason老歌迷
遇到过,最后重做了几次都是这样。
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问
免疫组化
秋秋欣欣
二抗干了的话就有影响如果只是短暂没干就没有影响
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问
请问为什么细胞在T25培养瓶中生长状态较好,但转移至6孔板后,细胞大量漂浮?
Eason老歌迷
可能跟你加液的温度有关。如果你细胞刚刚拿出来换液加液,培养基也是从4度冰箱拿出来不久,很容易细胞就会冻死了。建议你最好把培养基先在培养箱里边孵育15min先。另外,跟你细胞的生长状态也有关。加药之前的细胞可以用高点的血清浓度培养。保证细胞状态良好。或者放在37度水浴锅里孵育也可以,或者是培养板本身的问题,你再换换其他培养板试试看。再有可能就是细胞状态问题了,种板时的血清浓度调高试一下。
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问
这是细胞污染吗
Eason老歌迷
可通过培养基颜色变化、显微镜下观察判断。如细菌污染后细胞培养基变黄色,而且镜下有小黑点,且有规律的运动。而酵母污染后培养基变紫色,镜下可见透明、且连成一串的圆形。但如果是支原体污染的话,由于最开始支原体生长缓慢,而且显微镜下难以看出。如果不是可能就是你的细胞老化产生的碎片,或者是培养基的问题。
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问
WB曝光时间偏长(10分钟以上),曝光出的条带有几条,理论上正确位置和不应该出现的位置都有条带,结果可以用嘛?
Dfcaizjm
感觉你这个时间太长了,我们一般一条带就3分钟左右,建议你缩短一下曝光时间
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问
做wb,flag片段会被150kDa的融合蛋白遮蔽住,而检测不到吗?
Eason老歌迷
如果有,就要看Flag标签是不是正确表达了,如果表达不正确也会影响到检测的。
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问
用SD大鼠肾皮质组织提取出来的足细胞传代总是不成功是什么原因
Eason老歌迷
一个是你的培养基成分问题 二个是你的传代时间的选择。先网上查看ATCC对该细胞的建议,注意你使用的培养基种类、血清浓度及类型、传代细节等。有的细胞对营养物质要求高,需要胎牛血清,而当你使用小牛血清时,可能导致细胞状态不好。消化时间的掌握与经验有关系,难消化的细胞需要放在37℃培养箱里帮助消化。若附近有显微镜,就时不时镜检,看细胞变圆了就可以,再移液器吹打几下就能吹打下来;若没有显微镜,就看培养瓶底
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问
六孔板一个孔长满细胞大概有多少呀。
Eason老歌迷
可能是有2.5x10的6次方个
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问
请问这个细胞是被真菌污染了吗
balalaLy
应该是污染了,但不大确定是哪种菌,扔掉重新复苏吧
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