想问一下跑出来的GAPDH背景很黑，会不会跟蛋白提取有关？

背景黑的话应该不是跟蛋白提取有关，应该跟封闭或者抗体的问题

可能是没封闭好 ， 而且一次最好不要封闭太多膜， 以免封闭不充分。

有可能是一抗敷育时间过长或者转膜液使用次数过多导致的，建议减少抗体敷育时间和更换新的转膜液试试

可能是你的上样量太大。也可能是你的转膜时间太长了。或者是你的封闭时间有点短。或者是你的抗体浓度有点高。