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实验问答

31,425,228 科研人在看

问质谱和蛋白质组学的数据分析应用

huarenqiang5

可以利用双杂交技术和质谱法来研究蛋白质相互作用网络的构建。

3 回答973 围观

问中药配方颗粒溶解过滤过可以直接开展细胞水平的研究吗？

龙大人驾到

中药配方颗粒溶解过滤后的液体可以用于细胞水平的研究，但需要注意以下几个方面：1. 细胞毒性评估：中药配方颗粒中可能存在活性成分或化合物，对细胞有潜在的毒性。在进行细胞水平的研究之前，需要对中药配方颗粒溶液进行细胞毒性评估，确保其对目标细胞不会产生明显的毒性影响。2. 有效成分的验证：中药配方颗粒溶液中可能含有多种化合物，其中是否存在对目标细胞具有生物活性的有效成分需要进行验证。可以通过分离、纯化和

4 回答852 围观

问请问外泌体提取需要无菌环境吗

sswei

外泌体提取过程是需要无菌环境的。

3 回答1091 围观

问我是用LPS诱导树突细胞成熟，结果细胞死亡，查了有不同的说明的，是不是一定要suitable for cell culture?

huarenqiang5

是的，一般都需要suitable for cell culture。

4 回答1469 围观

问qPCR实验内参的值都比目的基因的值大，这正常吗。

龙大人驾到

在 qPCR 实验中，内参基因（也称为参考基因或稳定表达基因）应该具有相对稳定的表达水平，不受实验条件或处理的影响。它们通常用作标准化因子，用于对目的基因的表达进行相对定量。一般情况下，内参基因的表达值应该与目的基因的表达值接近。如果在 qPCR 实验中发现内参基因的值普遍比目的基因的值大，这可能是由于以下原因之一：1. 选择不合适的内参基因：内参基因的选择是关键步骤，应该选择具有稳定表达水平的基

5 回答16395 围观

问组织蛋白酶和趋化因子共同孵育看结果，可以做免疫共沉淀来验证吗？

sswei

免疫共沉淀能看出组织蛋白酶对趋化因子的切割后产生更小分子条带的反应

5 回答412 围观

问RNA琼脂糖无条带求解决方法

huarenqiang5

主要考虑以下几点原因和建议:1.样品制备不当样品制备是影响琼脂糖凝胶电泳结果的重要因素之一。如果样品制备不当，可能会导致琼脂糖凝胶电泳没有条带。例如，DNA样品的纯度不够高、浓度过低或过高、RNA样品的完整性不好等。解决方法:在样品制备前，应该仔细阅读相关文献，了解样品制备的方法和注意事项。同时,应该对样品进行质量检测,确保样品的纯度、浓度和完整性符合要求。2.电泳缓冲液配制不当

5 回答7073 围观

问转染miR mimic，靶基因的mRNA反而升高了，靶基因的蛋白时有时无的降低是什么情况

龙大人驾到

当转染miRNA mimic（miR mimic）后，靶基因的mRNA反而升高，而靶基因的蛋白时有时无的降低，可能存在以下几种情况：1. miRNA的靶向调控机制复杂：miRNA可以通过与靶基因的3'非翻译区（3' UTR）结合，导致mRNA的降解或抑制翻译，从而调控基因表达。然而，miRNA的调控机制非常复杂，可能受到其他转录因子、蛋白质相互作用和细胞环境等多种因素的影响。因此，miRNA转染后

3 回答2480 围观

问siRNA转染细胞，24小时可以提RNA吗？

龙大人驾到

在进行siRNA转染后的24小时内，通常无法直接从细胞中提取足够的RNA用于下游分析。这是因为siRNA转染后，siRNA需要一定时间才能进入细胞并发挥作用，以降低目标基因的表达水平。此过程需要一定的时间，并且目标基因的降低可能需要更长的时间才能观察到。通常，在进行siRNA转染后，需要等待一定的时间（通常是24至72小时）以使siRNA充分发挥作用并降低目标基因的表达。这样，细胞中的RNA水平才

5 回答4593 围观

问请问为啥我的免疫组化染出来片子是紫色的呀，其他人都是浅蓝色的

skyye

染色最后一步，苏木素染色后需在自来水流动水下冲洗（注意不要直接冲在拨片上）反蓝15min左右，胞核便会呈浅蓝色的。

7 回答1981 围观

问考马斯亮蓝（兰）R-350是什么呀，怎么和R250、G250区别呀？实验时怎么选择，原理是什么

huarenqiang5

考马斯蓝R-250和G-250染料是考马斯染料的两种最常见的化学形式，是二磺化的三苯基甲烷化合物。R-250（红色）缺少以G-250（绿色）形式存在的两个甲基。“250”最初表示染料的纯度。考马斯蓝染色原理：不同的颜色是染料分子不同带电状态的结果。当pH值小于0时，考马斯蓝G250染料会腐蚀所有带正电荷的三个氮原子，颜色为红色最大吸收波长为465nm。当pH值约为1时，染料的总电荷为+1（2-磺酸

6 回答2008 围观

问请问人角膜内皮细胞系B4G12和21T有什么区别么？这两种细胞系建模内皮间质转化模型或衰老模型会有区别么？

龙大人驾到

人角膜内皮细胞系B4G12和21T是两种不同的细胞系，它们在细胞形态、生长特性、分子表达等方面存在一定的差异。具体来说，B4G12细胞系是一种来源于人角膜内皮的细胞系，主要用于研究角膜内皮细胞在生长、分化、代谢等方面的生物学特性。而21T细胞系则是一种来源于人角膜内皮的转化细胞系，具有更强的增殖能力和更弱的细胞一致性。当建模内皮间质转化模型或者衰老模型时，这两种细胞系的差异可能会对模型产生影响。例

3 回答793 围观

问大于220kd的蛋白该怎么设置转膜条件，还有跑胶时怎样可以使杂带减少，哪位帮忙解决一下，谢谢；？

龙大人驾到

对于大于220 kDa的蛋白，可以考虑以下转膜条件：1. 延长转膜时间：由于大分子量蛋白需要更长的时间才能转移到膜上，因此可以考虑延长转膜时间，例如将转膜时间延长至过夜。2. 降低电流密度：降低电流密度可以减少转膜时蛋白的聚集，从而提高转膜效率。建议使用电流密度为0.8 mA/cm2左右的条件。3. 使用更大的孔径滤纸：使用更大孔径的滤纸可以减少蛋白的滞留，提高转膜效率。对于跑胶时如何减少杂带，可

5 回答2286 围观

问如果筛选出的差异代谢物很少，该怎么办？

龙大人驾到

当利用常用的阈值筛选差异代谢物时，如果筛选到的差异代谢物很少，可能有以下几个原因：1. 样本数量不足或质量差：样本数量不足或样本质量差可能导致差异代谢物的筛选结果不够准确和可靠。2. 表达水平差异较小：如果筛选的阈值较高，可能会导致表达水平差异较小的代谢物无法被筛选出来。3. 生物学变异：生物学变异可能导致差异代谢物的筛选结果不够准确和可靠。为了解决这些问题，可以考虑以下几个方法：1. 增加样本数

5 回答2718 围观

问石蜡切片细胞不成形，部分组织脱落。求大神指点！应该怎么解决呢？

龙大人驾到

当在制备石蜡切片过程中遇到细胞不成形和组织部分脱落的问题时，以下是一些可能的解决方案：1. 固定和处理组织时注意优化：确保你在固定组织时使用适当的固定剂和处理方法。不同类型的组织和细胞可能需要不同的固定和处理条件。确保使用适当的浓度和固定时间，并遵循标准的组织处理步骤。2. 组织处理中的脱水和浸渍：在脱水和浸渍步骤中，确保逐渐将组织转移到石蜡中，以确保组织的完整性。逐渐增加浓度的醇溶液（例如，70

5 回答1192 围观

问有没有病理技术这一块的交流群呀，比如HE染色的问题，脱水不佳问题，切片问题，免疫组化，分子病理等，想要学习

skyye

丁香实验板块有很多包括病理技术染色等类似的实验交流，可以搜索试试，或者找病理科老师或实验室做过该类实验的师兄师姐请教的

4 回答580 围观

问趋化因子CCL20和CTSD/CTSB怎么共同孵育，怎么继续做Western实验

龙大人驾到

想要在硬骨鱼中重复一篇文献中的实验，这篇文献中的实验主要是研究组织蛋白酶B和D对趋化因子CCL20的切割作用。下面是一些可能有用的步骤：共同孵育：共同孵育是将两种蛋白质一起孵育的实验步骤，目的是研究它们之间的相互作用。在共同孵育前，需要确定孵育的最佳条件，如温度、时间和缓冲液等。对于硬骨鱼中的组织蛋白酶和CCL20，可以先尝试在不同的缓冲液中进行共同孵育，例如PBS缓冲液、Tris-HCl缓冲液等

3 回答746 围观

问请教用加尾法进行microrna的反转录和qpcr

从头酷到矫

你好.可以分享一下u6的引物序列嘛

2 回答802 围观

问求助 |给细胞转染了miR mimic，目标蛋白反而升高了。

yqyq28

你好！请问解决了吗，我也遇到了这种情况！！

3 回答757 围观

问miRNA加尾法进校qPCR的通用引物序列，请问哪位大佬能提供一下

秋秋欣欣

我用的U6引物序列是① U6snRNA F Primer 5‘ATTGGAACGATACAGAGAAGATT② U6snRNA R Primer 5’ GGAACGCTTCACGAATTTG

3 回答1779 围观

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