大于220kd的蛋白该怎么设置转膜条件，还有跑胶时怎样可以使杂带减少，哪位帮忙解决一下，谢谢；？

对于大于220 kDa的蛋白，可以考虑以下转膜条件：

1. 延长转膜时间：由于大分子量蛋白需要更长的时间才能转移到膜上，因此可以考虑延长转膜时间，例如将转膜时间延长至过夜。

2. 降低电流密度：降低电流密度可以减少转膜时蛋白的聚集，从而提高转膜效率。建议使用电流密度为0.8 mA/cm2左右的条件。

3. 使用更大的孔径滤纸：使用更大孔径的滤纸可以减少蛋白的滞留，提高转膜效率。

对于跑胶时如何减少杂带，可以考虑以下方法：

1. 调整电泳条件：调整电泳条件，如缩短电泳时间、降低电压和电流等，可以减少杂带的出现。

2. 减少蛋白质负载量：适当减少样品中的蛋白质负载量可以减少杂带的出现。

3. 使用更高纯度的试剂：使用更高纯度的试剂可以减少杂带的出现，例如使用高纯度的蛋白质和试剂等。

4. 增加缓冲液流速：增加缓冲液流速可以减少杂带的出现，例如增加电泳缓冲液的流速或者使用梯度缓冲液。

5. 使用更好的胶：使用更好的胶可以减少杂带的出现，例如使用低背景胶、高分辨率胶或者特定的分子量范围胶等。

总之，调整转膜条件和电泳条件、减少负载量、使用更高纯度的试剂、增加流速、使用更好的胶等方法都可以减少杂带的出现。

转膜时间2小时，300毫安。杂带与抗体特异性有很大关系，操作时注意多洗几次

大蛋白的话要注意电泳时能好好的分开，减少杂带要注意封闭好，一抗浓度稍微低点

100V 2小时足够了，Western转膜液70%水，20%甲醇，10%10xWestern转膜液（电转液），至于恒压与恒流哪个好，因人而异吧，各有各的喜好，恒流产热比较少，我习惯恒压转，但是因为电流会随着转膜时间的增长会加大，所以产热会多一些，不过一般没什么问题，把转膜的盒子包在冰里就好，或者有条件觉得话，放在冷室里就行，一般问题不大。

就是大分子蛋白转膜那些注意的点，去除去垢剂、降低甲醇浓度、慢速转印、湿转等；

我转过210kd的蛋白，Western转膜液配方（1L)：Tris :3.025g，glycine：14.4g加入约900ml水溶解后加入100ml甲醇至1L即可。PVDF膜（0.45uM)，湿转：350mA恒流转60min即可。