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        细胞复苏后细胞状态不好有哪些原因?怎么解决?

        相关实验:冻存细胞的复苏

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        5 个回答

        user-title

        balalaLy

        有帮助

        细胞有污染,细胞老化(传代次数太多),冻存步骤不合理。养一段时间如果还是不好就直接弃了吧

        user-title

        麻黄连翘赤小豆

        有帮助

        原因很多,冻存液的好坏,冻存细胞的状态,冻存的温度,复苏太慢等等

        首先你要按照不同细胞不同冻存条件冻存,有些冻存液需要梯度冻存,有些血清冻存会比较好。冻存尽量选增殖较快的时候消化下来冻存,冻存后不能反复冻融

        user-title

        bamboopiggy

        有帮助

        1.可能细胞的冻存和溶解过程有问题。2孔板有问题。3培养基的问题

        user-title

        府宅

        有帮助

        细胞数太少,健康生长需要细胞间的连接,冻存时细胞浓度低于1-undefined105个/ML,复苏很难成功的。解决:细胞计数,离心后调整细胞浓度。记得不要重新洗细胞,刚复苏的细胞比较脆弱。

        user-title

        dxy_gwrp7ndq

        有帮助

        1、冻存的时候是不是消化的时间过长,这是一般人所注意不到的,即使书上也不讲这个问题,但我因为这个问题就两种肺癌细胞和一种肝癌细胞专门做过试验,这个绝对是绝大部分人细胞复不活的一个原因。太长的消化时间会让细胞复苏时失去贴壁能力,表现为先贴后死,原因是在你复苏的时候细胞已进入凋亡程序,不可逆转的死亡。

        2、冻存液好不好,是什么,甘油还是DMSO,质量非常重要,否则也会死亡。

        3、冻存液的量加的是不是太多,ATCC推荐是不超过7%,大于5%,太多也不好。

        4、在冻存的时候是不是把DMSO混均匀,这个有一些影响,但不算太大。

        5、冻存是否按部就班,就是所温度梯度是不是把握严格,很多人容易忘却这个事情,因为这个东西流程长。

        6、如果细胞污染,是否能很快看到。从这个角度讲建议去除离心这步。

        7、细胞在冻存前是否过密。

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