研磨细胞会导致蛋白质结构破坏吗？

研磨不会直接破坏蛋白结构。

一、关于研磨步骤和裂解液

1.研磨破坏的是细胞之间的黏连，将细胞分散开

2.裂解液含有裂解和促融成份，裂解细胞，释放蛋白。

二、了解下蛋白的结构和降解

蛋白有一级结构，氨基酸共价键链接，酶和酸碱可水解；高级结构靠氢键 疏水作用 等作用维持，容易破坏，通常使用的是表面活性剂。

三、了解下蛋白的大小

枪头是毫米大小，细胞是微米级别，蛋白是纳米结构。1毫米=1000微米 1微米=1000纳米。枪头很难破坏蛋白，或者基本不可能。

四、了解下研磨的优缺点

研磨在破坏细胞黏连的同时，会产热，加速了蛋白的降解，蛋白酶的活性温度通常在37℃。

五、如何降低蛋白的降解

研磨的时间和温度

裂解液的选择

蛋白酶抑制剂的添加

尽量减少反复冻融

研磨只是让膜破，蛋白质流出，可以用WB检测，不会破坏蛋白质，除非其他因素温度或者化学物质等

ip不是要阴性对照，对照组拽不下来才对吗？另外你的ip的buffer的具体配方是什么？是公司买的还是自己配的？

一般的ip buffer里面的去污剂用的都比较弱，不会破坏binding的

可能是其他原因，枪头研磨应该不会破坏蛋白质结构。

会的，小分子物质当然不易破坏，但无论是细胞匀浆或组织匀浆还是超声波破碎，都会破坏细胞内一些生物大分子的活性，尤其对细胞内酶的活性有很大的影响，这些物理过程中伴随剧烈的机械剪切力和热效应，所以在实验中都要尽量保持冰上操作，而且操作要尽量短促，将这种破坏降低到最小程度。

不会破坏，蛋白质太小了，能破坏的也就是达到细胞层次。