实验问答

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科研学霸天团，48小时有问必答

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问请问验证第一次单交换是用转化子扩培后得到的单菌落吗？验证引物设计在同源臂上，出现两条带再进行蔗糖筛选

粥辰辰辰辰

验证第一次单交换是用转化子扩培后得到的单菌落，验证引物设计在同源臂上，出现两条带再进行蔗糖筛选

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问请问我往商品化灭活疫苗加入自己纯化的IFITM1蛋白作为佐剂，来免疫14日龄左右的小鸡，这个每羽份的加入量应该多少比较合适呢

周末也要努力呀

建议设置浓度梯度和更加保险，别人的不一定适合你的实验环境。加减15左右的区间

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问用TGF-β1诱导纤维化，研究内皮细胞发生内皮间质转化，选用10ng/ml的TGF-β1，应该诱导多长时间？

周末也要努力呀

6小时以上，可以做一个时间梯度

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问电泳时样品没有溢出到其他泳道，胶进行考马斯亮蓝染色后，各个泳道蛋白都连在一起了，而且泳道越来越宽，为什么呢？

balalaLy

上样量太大了，蛋白向两边溢了。

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问跑SASPAGE胶，发现条带比预测大小大20kDa，目的条带10kda

静心观照

1.确定蛋白是内源的还是外源的，如果是外源蛋白是不是全长序列;2.SWISSPROT 数据库查询该蛋白是否有其他isoform ;3.SWISSPROT 和文献查询蛋白质是否有剪切活化，剪切活化造成蛋白变小;4.确定蛋白质是否是二聚体或多聚体5.NCBI和SWISSPROT 查询蛋白质表达后是否有修饰，如有修饰会导致蛋白质增大如果除了上述 5条，还是没找到问题在哪里，那就回过头看看是不是预测不准或

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问请问热酸蚀可以用锥形瓶吗

feixue7758527w

是的，可以用锥形瓶的，大多数锥形瓶都是耐酸碱的。可用的。

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问做wb蛋白组学分析，大家对于相同kd是直接洗脱后重敷显影还是另外做多一条？有方案的大神可以分享一下

静心观照

相同KD的蛋白，如果完全重合做好多做一条或重新跑。当然，也可以洗脱一下重新孵育新的抗体，后者可能会出现前一个抗体没有洗掉，或者连同蛋白完全洗掉的情况。

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问求助传统过碘酸钠法标记碱性磷酸酶

高山云初

都是需要做的，提高实验成功率。

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问Taqman荧光PCR有CT值，但扩增曲线没有明显起峰，纵坐标Rn特别低，扩增产物拿去跑胶，有条带

高山云初

①人为原因：操作不规范导致交叉污染，比如存在阳性质控、阳性标本残夜或者气溶胶通过加样枪、脏手套等造成携带污染。②标本原因：标本含有少量病毒(目的基因浓度低)，标本存在其他干扰物质。③仪器原因：提取仪器或生物安全柜污染、机器出现故障、存在非特异性扩增等。④试剂原因：反应液放置时间过长或反复冻融。

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问想咨询一下大家，有没有生物学领域，构建过T7噬菌体cDNA展示文库的铁汁呀？

高山云初

具体哪方面的T7噬菌体cDNA

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问scfv在膜上不表达

高山云初

无义序列一般不会，影响的因素有几点：1、翻译起始位点现在大部分的表达载体都提供起始位点，所以它已经把起始密码子与核糖体结合位点的距离进行了优化，一般情况下不需要自己再添加，不过还是要留意载体图谱上是否注明有起始密码子和终止密码子。2、GC含量表达序列中的GC含量超过70%的时候可能会降低蛋白在大肠杆菌中的表达水平。3、mRNA二级结构在起始密码子附近的mRNA二级结构可能会抑制翻译的起始或者造成翻

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问大肠杆菌

高山云初

不影响实验操作及结果，继续，只是细菌变异了

3 回答827 围观

问吞噬基因求教

sswei

TREM2、CD33、CR1、ABCA7（ATP binding cassette transporter A7）、PTK2B、MS4A和SHIP1等基因被发现在小胶质细胞中可以检测

3 回答335 围观

问羊抗鼠血清制备

高山云初

抗血清的制备程序免疫原的配制1、福氏不完全佐剂（ Ferund ' S adjuvant , imcomplete , FIA )100克石腊油与50克羊毛脂置于盐水瓶中充分涡旋混匀，过滤除菌或高压灭菌（10P15分钟），置4℃存放备用。（有市售产品， Sigma )2、福氏完全佐剂（ Ferund ' S adjuvant , compelete , FCA ）取干粉卡介苗25-250mg于10

3 回答531 围观

问噬菌体展示做ELISA结果有疑问，求求救命

huarenqiang5

你的这个情况建议首先排除细菌或支原体污染。

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问外排泵高表达

高山云初

没有倍数标准，比标准高就可以。

3 回答300 围观

问qPCR相关实验问题

静心观照

是荧光值阈值线，这个是可以取消的，设置一下就可以了

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问细胞实验的实验服多久洗一次？

雪格格619

当然最好每天洗了，看自己时间和精力吧。我一般一周洗两次，哈哈

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问为什么电泳时候marker最后一条带特别亮

loveliufudan

在电泳过程中，如果marker的最后一条带特别亮的原因可能有以下几个可能性：1. 过度加载：过多的marker在电泳过程中会导致浓缩效应，使最后一条带出现特别亮的情况。确保在加载样品时按照建议的浓度和体积进行操作，避免过度加载。2. 原始浓度差异：不同分子量的marker通常以不同的浓度提供。如果最后一条带对应的分子量标记在marker溶液中的初始浓度较高，那么在电泳过程中会表现为特别亮的带。3.

3 回答3161 围观

问【求助】酶切连接构建的载体测序结果存在突变

dxy_tdv6gc82

请问你解决这个问题了吗我也遇到了🥲

5 回答3387 围观

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