实验问答

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科研学霸天团，48小时有问必答

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问小鼠（白血病模型）外周血上流式检测hcd45+细胞的比例。为了评估移植水平。各位大佬求详细步骤，没接触过流式！！！🙏

Eason老歌迷

具体可以参看这篇华科同济血液内科的教授写的文献“急性淋巴细胞白血病-NOD_SCID模型的建立”，里面讲的很详细。

1 回答218 围观

问细胞间培养液有渣且细胞形态不饱满，是黑胶虫吗还是胰酶消化的问题（消化时难消化）。

申东熙老伯

细胞形态不饱满有可能是消化的问题，难消化的话可以试着再摸索一下消化条件，37℃培养箱消化，时间适当加长，消化结束可以轻轻拍一下培养皿，看一下细胞有没有脱落，然后再终止消化，多吹打几次把细胞完全分离开。

4 回答191 围观

问背景有黑色斑点或有不均匀的白色斑点以及暗背景上白色带，是什么原因导致的？

bamboopiggy

1.背景黑斑一般是抗体不特异。2，不均匀的白色斑点可能是封抗体的时候，气泡没有赶好，3，暗背景白色条带，可能是蛋白量太高，烧心了。

5 回答261 围观

问求蛋白纯化和测序方面的书籍名字作者

大草原的小灰驴

Terry SpeedMichael S. WatermanKeith R. Mitchelson R R 伯吉斯马文丽宋艳斌

3 回答296 围观

问请问有没有什么好方法能让磁珠在裂解液里面待的更久

bamboopiggy

可是试着调整裂解液和缓冲体系的PH，来确保磁珠的稳定性。

3 回答285 围观

问RNA酶如何灭活

Topmicro

采用0.1%的DEPC溶液浸泡实验器材，通风橱是室温过夜处理，然后灭灭菌锅121摄氏度灭菌30min以上，再烘箱烘干就行。

6 回答3544 围观

问一换培养基就污染？

bamboopiggy

是国产血清的质量问题，你换用gibco的血清吧，有些细胞很挑血清的。

5 回答645 围观

问分离胶贱到眼睛会不会有影响吗？

bamboopiggy

大量清水冲洗，如果眼睛没有别的不适感，也就这样了，不行就去医院。建议以后做这种实验，带护目镜吧

4 回答340 围观

问各位前辈看看，这是属于细胞凋亡还是细胞焦亡。

bamboopiggy

你跑一下凋亡和焦亡的marker看一下吧，从形态很难判断。

4 回答493 围观

问PFGE结果图

bamboopiggy

脉冲场凝胶电泳跑的是大分子量的DNA，出现黑色的位置，说明没有DNA存在在那个位置，DNA条带的位置比较往下。

2 回答678 围观

问多黏菌素B药物浓度配制

Eason老歌迷

50万单位，1mg=10000单位，你可以算出它的质量，通过质量和体积，可以得出浓度，然后就是稀释即可。

1 回答751 围观

问[求助]用ELISA测血浆中TfR1（转铁蛋白受体1）

冷泉港蛋白

1.如果是临床试剂盒，试剂盒说明书会显示。厂家在开发试剂盒的时候，抗凝、促凝及不同类型抗凝剂，厂家必须做相关实验，只需提前阅读说明书就行了。2.如果是科研类试剂盒，有些厂家也会做相关类似验证实验，可能不会做那么多类型。3.如果试剂盒说明书没有显示。你在UNiProt数据库查下蛋白的结构信息，看下目标蛋白是否含有金属离子，如果有的话，最好不要使用含有抗凝剂的管子，螯合金属离子后，会影响蛋白结构。

3 回答425 围观

问求助 | Ficoll密度梯度离心法分离PBMC 在离心管底出现细胞膜吹不开

大草原的小灰驴

把血液加入淋巴细胞分离液一步非常关键，必须要保持液面的平衡，要将离心管口45度倾斜，然后以非常慢的速度，一滴一滴的靠着离心管内壁加进去，慢慢的加入几滴形成一个界面，全过程需要很稳定的手法。1、初始PBMC估计1毫升可以分出来100万个细胞。常规5 ml外周血可以分到undefined10^6-undefined10^7 cell，按照自己所需确定外周血体积。2、分离液与稀释后的血液比为1：2。外周血获得后进行密度梯度离心，最

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问求助！请问WB我的条带为什么PLC5显不出Vimentin,Huh7显不出E钙呢？

bamboopiggy

1.首先确定你的细胞确实是plc/prf/5 和Huh7。2.去找你的师兄师姐要他们的细胞试试。3.Vimentin 和E-cadherin在不同的细胞，可能位置稍微你差异，你把膜切的大一些试试

2 回答444 围观

问原代海马神经元-树突标志物MAP2染色

olaf闰闰

好漂亮，这是共聚焦显微镜拍的吗？

3 回答1078 围观

问如何用荧光显微镜观察悬浮细胞内离子

Eason老歌迷

染料孵育后离心取细胞沉淀，直接涂在玻片上测。细胞内离子可以用多种仪器，如荧光显微镜、流失、激光共聚焦等。离子染料比较关键，一般有Fluo-2，Fluo-3，Fluo-4等，我用过Fluo-4，感觉还可以，可以用荧光显微镜检测。

2 回答618 围观

问求助🆘bax免疫荧光1:50还看不到绿色荧光为什么呢？做bax的WB也是1:50信号也弱？谢谢

litorch

谢谢高手指点!下次我试一下红光，其他老师能做出来，我和他们条件一样，做出来效果就不好

5 回答567 围观

问求小鼠肥胖程度分级标准

whilt-shirt

可以用lees指数将小鼠肥胖分为轻中重

2 回答928 围观

问如何判断eLisa和高效液相对血药浓度的精准？？

大草原的小灰驴

首先需要做倍比稀释的预实验，判断药物浓度与ELISA反应后的吸光度OD值是否呈线性关系，并做出拟合曲线，对其方程公式做相关系数等常量的假设检验。

4 回答573 围观

问萌新求教流式细胞术检测CD4,CD8计数

Eason老歌迷

你这几个问题，我做一个统一回复。需要肝素抗凝静脉血1ml，不同荧光素标记的抗CD3、CD4、CD8单克隆抗体，同型阴性对照荧光物，溶血剂，固定剂，流式细胞仪。具体操作1、100μ1抗凝血加20μl荧光单克隆抗体，同时做阴性对照。2、避光室温作用20min，溶去红细胞后，固定剂固定。3、上流式细胞仪测定，以阴性对照测出本底参数，调节荧光补偿，设定阳性参数值，软件将计算出阳性表达细胞比例。需要注意1、

2 回答710 围观

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