dapi染色时间相同，不同样本亮度不同是怎么回事

有可能是没混匀，建议重新做一下试试

不同细胞对dapi渗透能力不同，

你确定你所有的条件一样？包括激发光的强度？增益等参数？这个一般染色时间一样，你标本你都完全覆盖住的话，应该是一样的。dapi一般会染的比较深。除非你透化没有做好。

荧光染色有猝灭的时候，光线多少也会有影响，尤其是荧光染料的质量，基本决定你染色的成功与否

可以是PBS稀释溶解不充分导致的