实验问答

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科研学霸天团，48小时有问必答

全部

细胞

问求助:免疫组化染色全是一片红色？

府宅

组织变干一下子染太多片子的时候，容易出现这种情况。解决的办法就是不要贪多嚼不烂。一次少染几张。还有就是试剂充分覆盖组织，超出组织边缘2 mm。然后用PAP笔在组织周围画一个圈圈，把修复液圈在里面。避免修复液流走。圈圈应该距离组织边缘3-4 mm。浸泡时间过长切片在缓冲液或修复液里面浸泡过一夜，也会引起杯具。这都是偷懒的做法。但是有时候也是可以偷一下懒的。独门秘技就是4°C冰箱。只要把容器放在4°

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问应激颗粒免疫染色特异性低

Eason老歌迷

特异性弱，可能有几个原因。一个是标本固定、包埋不当。固定剂不佳、固定时间过长、浸蜡包埋温度过高，会导致抗原完全破坏，这些都是常见原因。由于不同的抗原对环境耐受性不同，有些标本虽然能做出一些较好的指标，但不稳定和含量低的抗原可能已消失殆尽。二是抗原修复问题。由于免疫组化技术的发展，现在能在石蜡切片中显示的指标很广。相应地，除了优质的抗体外，我们也越来越依靠各种暴露或称修复抗原的方法，包括酶消化、热修

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问菌种保种太长回影响质粒吗？

府宅

菌体老化死亡会发生菌体自溶,1.会影响质粒产出率,2.菌体自溶后可能会有小片段的基因组DNA污染提取的质粒.

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问流式单标是否需要固定和封闭

bamboopiggy

如果染pi或膜内是需要固定的，你做膜表面不用固定，但是还是要封闭一下的。

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问什么样才叫三次独立重复实验啊？

bamboopiggy

同一个实验，在不同时间点，再做一次，或者是同一个实验，在相同的时间点，同时做，但是所用的试剂，细胞，动物，都是平行的，做三遍。

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问筛选稳转细胞系用质粒还是慢病毒

府宅

1安全性高：由于慢病毒剔除毒性基因，目前实验未发现致病性，已被用于CAR-T治疗于人体；2 表达时间长：慢病毒通过将外源基因整合到宿主细胞基因组上，可实现目的基因长时间稳定的表达，不随着细胞分裂传代而丢失，是细胞实验的首选；3 免疫原性低：直接注射活体组织不易造成免疫反应，适用于动物实验。

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问WB提蛋白浓度偏低怎么办呢？

bamboopiggy

下次裂细胞，少加点裂解液，一般wb上样20-40ug就够了。你这次的蛋白可以试试用大梳子齿的，增加上样量试试。wb，估计要看你踩到什么坑里，一步一步的解决了。各种小细节太多，包括仪器，液体，样品，膜，等等的

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问自噬LC3不变，p62反而增加，有朋友遇到同样的情况吗

bamboopiggy

遇到过，我遇到过p62增加，lc3也增加的，这个可能是在自噬的不同阶段，LC3的改变和p62的改变也不是一直是一致的。

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问B16 melanoma 复苏培养及冻存的方法

bamboopiggy

B16 很皮实，用DMEM高糖的培养基，加10%的血清，1%的双抗就可以。冻存液用普通冻存液就可以。

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问海藻酸钠微球的用途有哪些？

你好几和户

海藻酸钠微球可做血管栓塞剂。通过介入栓塞靶器官血管（物理性/机械性封堵），治疗各种实体肿瘤的“KMG 及其系列载药 KMG”，涉及的临床介入治疗领域包括：中晚期肝癌、肺癌、肺结核、肺咯血、肾癌、妇产科良、恶性肿瘤、产后大出血、血管瘤、甲亢和脾亢减能、外科器官移植手术的术前栓塞等多方位多学科的临床治疗领域。

3 回答1078 围观

问请问wb检测信号通路应该怎么敷

bamboopiggy

可以切膜，按照marker切就好，如果想striping，建议先孵磷酸化的，然后striping后，再孵total的

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问免疫荧光双染问题

Eason老歌迷

我觉得如果文献都说他在神经元内表达，那么你染色的结果就不太对，可能是染色的试剂问题。

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问CAR proximal signaling CAR近端信号

Eason老歌迷

可以参看这篇文献，Title: Inefficient CAR-proximal signaling blunts antigen sensitivity是奥地利维也纳医科大学Johannes B. Huppa和德国维尔茨堡大学医院Michael Hudecek研究组合作取得最新进展。他们揭示无效的嵌合抗原受体（CAR）-近端信号减弱了抗原敏感性。该研究于2020年7月6日发表于《自然—免疫学》。

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问星形胶质细胞染色图片

bamboopiggy

你有啥问题啊？感觉染的很漂亮啊！

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问蜡样芽孢杆菌涂板培养18个小时，有小的菌落，是否为杂菌污染？

Eason老歌迷

这个看着，我感觉并不是杂菌污染。

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问求助p65免疫荧光入核的统计分析

是个幸运的小朋友

我是用的显微镜自带软件测定的，直接数核阳性的细胞

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问原代IF：人结膜囊成纤维细胞

丁香一方

谢谢老师分享的图片及经验，这染的觉得没谁了

3 回答444 围观

问小鼠采血血清需要抗凝管吗？

是个幸运的小朋友

如果要取血清做elisa的话就不要抗凝剂，取血后，迅速常温离心取上清就好

5 回答5572 围观

问求助，关于粪菌保存

养点鱼吃火锅

重新取吧，会冻死的，而且结果不准确没法用了。下次记得加甘油。

3 回答546 围观

问请问向细胞培养基中添加不同浓度的必需氨基酸，若添加后呈紫色，怎么调节培养基PH？

精准检验每一天

这要看一下这些氨基酸的水解特性，还有可以用缓冲液调节pH值的，希望能帮到你！

2 回答647 围观

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