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问
为什么我的细胞提取液中没有目标蛋白?或者提出了很多杂蛋白
冷泉港蛋白
分子量太大了,表达不出来;也有可能同时有细胞毒性。1.你的重组蛋白分子量=27KD+130KD=157KD2.原核蛋白表达的分子量大小一般不能超过100KD(含标签);如果不表达,诱导剂浓度,温度,时间的调整方面,意义不大,不会实现从无到有的质变,只是个量变而已。3.如何解决: A.大蛋白很少使用大标签, B.截断表达 C.更换为真核表达系统 D.做实验之前先预研一下:文献和商业化蛋白的厂
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问
在显影液中显影1分钟和5分钟后,底片漆黑一片,是什么原因呢
balalaLy
要么是胶片本身曝光了,要么是压胶片的时间长了,建议可以同时压4-5张胶片,时间1分钟以内
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问
抗原检测出的分子量比资料上的大
whilt-shirt
有可能是抗原上有其他基团导致的
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问
如何验证细胞上有无某蛋白的存在
whilt-shirt
可以用WB或者免疫荧光试试,有的抗体是共用的,具体要看抗体的说明书
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问
免疫荧光加完一抗之后,需要室温孵育一会吗?还是直接4℃过夜就可以了?
whilt-shirt
直接4℃过夜就行,这样效果会好一点
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问
IL-1β曝光出的目标条带与分子量不符,正常31kDa,实际在35上面。怎么回事?MDA-MB-231亲本细胞系。
whilt-shirt
这是正常现象,说明书上只是理论值,实际根据样本的不同会导致分子量增高或者降低
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问
关于免疫沉淀实验的一个问题?
balalaLy
coip的原理就是用目标蛋白的抗体去拉然后分别用目标蛋白和结合蛋白的的抗体跑wb验证,或者是ip下来之后做质谱验证
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问
MRC-5细胞复苏后状态极差,比例是5:4:1,是说明书推荐比例,有必要提高血清浓度吗?
whilt-shirt
有可能是没冻好,建议更换成品的冻存液
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问
前后引物同时加入为什么会P出两条带
n0y0j7
碱基配对不是绝对正确,会有错配的,结合在不同地方,扩增出不同的条带
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问
酶联免疫实验为什么要设置复孔?
whilt-shirt
设复孔是为了降低加样和系统误差
3 回答
779 围观
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问
有的抗体在做IF时,效价很低,做wb时效价很高,说明书写明可以做IF和wb,种属也没问题,出现的原因?
whilt-shirt
这是抗体的原因,建议更换抗体试试
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问
coip怎么区分抗体轻重链?
此用户已注销
在IP实验过程中,很容易产生IgG重链轻链的干扰,严重影响对结果的判断。那么,要想知道怎么样减少这些干扰呢,首先要理解这些干扰是怎么产生的。最好选择两个不同种源的抗体。选择同一种源的抗体的问题在于:在WB之前进行的蛋白变性这一步,由于加样缓冲液中含有巯基乙醇,巯基乙醇会把抗体的重链和轻链之间的二硫键破坏,从而使的抗体变成重链分子55KD和轻链分子25KD。假设你IP的抗体是兔抗的,目的蛋白进行WB
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问
小鼠脾分离出来的细胞一次可以孵育四种抗体吗?
balalaLy
可以,比如两个鼠抗两个兔抗,但两个同种属的一抗亚型不一样比如一个是IgGa,一个是IgG2a,然后对应的二抗也是不同亚型。
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问
细胞免疫荧光的假阳性
此用户已注销
在免疫检测中,比如 ELISA,CLIA 或者侧向流免疫检测中,嗜异抗体 (HA),人抗鼠抗体 (HAMA) 和类风湿因子 (RH) 会通过与抗体的非特异性结合而降低检测的灵敏度和特异性,导致错误结果和诊断。 因此,非常有必要使用专门的免疫阻断剂来降低这些干扰引起的假阳性结果,从而提高检测结果的准确性
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问
为什么我的视网膜组织外核层全部是假阳性?
此用户已注销
视野检查假阳性率高是因为测试表上的阳性结果通常表示某些测试指标超出正常范围。此外一些阳性结果表明,身体疾病或生理变化会导致某些结果。相反,如果测试单或报告单呈阴性,大多数基本上否认或排除了某些病变的可能性。然而,由于环境因素、操作因素、实验方法或患者自身因素,没有阳性症状的人可能被检测为阳性结果,这被称为假阳性。
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问
咨询一下大家有关小鼠NK细胞的问题
Eason老歌迷
鼠源的就行。具体用量你可以参看这篇文献”IL-2及IL-15对小鼠原代NK细胞扩增数量及功能影响的研究”,讲的很详细。
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问
如何用image J统计WGA染色心肌细胞面积
bamboopiggy
你去搜这个帖子:ImageJ实用技巧——脑片分层灰度值统计(定量分析篇),应该可以解决你的问题
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问
求助 为什么我1000bp的条带pcr产物跑胶跑到了250的位置,之前跑都是正常的
n0y0j7
和之前肯定有不一样的地方,pcr试剂,引物,模板其中总有弄错的
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718 围观
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问
求助!关于生物信息学R语言的Robust Rank Aggreg包分析
Eason老歌迷
你代码输入错误了吧,我觉得,你可以按照我的代码试一试。
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问
小鼠(白血病模型)外周血上流式检测hcd45+细胞的比例。为了评估移植水平。各位大佬求详细步骤,没接触过流式!!!🙏
Eason老歌迷
是这篇文章吗?我之前做的时候看过的,“急性淋巴细胞白血病-NOD_SCID模型的建立”讲的还很详细。
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