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        在做免疫荧光实验时,怎么消除背景荧光?

        相关实验:免疫荧光技术

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        yjx2022

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        11 个回答

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        风闲少年

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        尽可能冰冻切片吧,然后每次清洗都要有三次,做好阴性对照,只加二抗那一组。

        user-title

        养点鱼吃火锅

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        严格去除切片上的石蜡残留 所有石蜡切片在染色前都需要通过二甲苯去除石蜡。

        适当延长血清封闭的时间至2h。可以考虑采用37℃孵育箱进行封闭,优化封闭时间,充分去除组织中的类属抗原。

        user-title

        balalaLy

        有帮助

        封闭时间可以适当延长,二抗浓度不要太高,设置阴性对照

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        府宅

        有帮助

        通过充分的预实验来摸索二抗孵育时间和温度。二抗孵育时间过久,切片的自发荧光会很强,不容易洗掉。

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        dxy_gwrp7ndq

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        如果在荧光二抗孵育的步骤停留过久,而未经过充分漂洗,肯定会有较多的荧光二抗残留在组织切片上。因此,在适宜的二抗浓度下,充分的漂洗会极大减少自发荧光。

        user-title

        你好几和户

        有帮助

        这种情况下可以选择将 组织切片变薄试试,也可以考虑换种封闭液或者增加封闭孵育的时间 。

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        此用户已注销

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        可以试一试用冷PBS缓冲液冲洗

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        申东熙老伯

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        降低抗体浓度,缩短染色时间,避免非特异性结合。

        user-title

        dxy_6adps4f2

        有帮助

        在抗体孵育前进行封闭可以降低抗体非特异性结合,从而降低背景荧光。

        user-title

        此用户已注销

        有帮助

        使用含DAPI的封片剂,不仅可以染核,还有防止荧光淬灭的成分。

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        whilt-shirt

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        这种情况可以试试降低二抗浓度。

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