实验问答

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科研学霸天团，48小时有问必答

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问免疫荧光定抗体GABA

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可以、细胞免疫荧光想染GABA，买抗体买Anti-ABAT/GABA-T是可以的哟

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问去除刺激源后的m2巨噬细胞稳定吗

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可以参考文献1. JoVE. June 2013 2. Sci Rep. 2020THP-1细胞向M1，M2的极化

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问组织放多久还可以做流式

WolfgangX7YL

要分活细胞的话最好立马做吧，冻了-20或者-80或者液氮都影响蛮大的，原则就是尽快做，在做之前都放在4度

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问肺癌细胞造的转移模型，用什么抗体指标做免疫组化还是免疫荧光可以确定转移部位的细胞

你好几和户

F1，TTF1阳性代表的是肺来源，KI67是主要看增长指数，其他HER2，KRAS或者P53、CK都证明来源。

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问学习睾丸网注射腺病毒，有做过的同学知道睾丸网注射的具体位置和技巧吗？

府宅

小鼠睾丸注射的实验步骤:1.麻醉小鼠:40-80mg/kg，注射时浓度一般为0.5%，腹腔注射。2.调节显微操作台的操作臂，将玻璃针尾部用打火机熏烤一下，装进操作臂内，旋好固定旋钮。3.小鼠昏迷后，用胶带固定四肢于硬纸板上。4.备皮:剪去小鼠腹部的毛。注意:剪下的毛妥善处理，勿污染小鼠腹腔。此步骤可不做5.开腹:逐层打开腹腔，表皮至肌层。6.将睾丸拉出腹腔:于膀胱旁边寻找与睾丸相连的脂肪垫，轻轻拖

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问PBMC的CD107a检测方法

府宅

有些组织有自发荧光的，这会造成本底高

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问LDH释放实验中的HLA分子抑制剂选择

你好几和户

可以选下面这些的Sodium oxamate，AZ-33，GSK 2837808A

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问做免疫荧光一抗是标签抗体，非特异性太多怎么办

冷泉港蛋白

1.如果用的是His标签抗体，特异性是比较差的，想调整的话，难度比较大，抗体本身特异性不好。因为是undefinedhis。undefinedhis、undefinedhis可能都会反应。2.如果用的是Flag标签抗体，挺好用的。可以调整下浓度和洗脱液。如果不行，换个进口抗体试试。

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问请教：coip实验IgG组出现阳性结果是什么原因？

你好几和户

简单说anti-A的抗体由特异性的识别A蛋白的Fab片段和IgG片段组成。但是anti-A抗体有可能有非特异性结合，这些就是背景。而IgG的阴性对照的引入就是为了消除这个背景。如果实验结果正确，那么“实验组”的条带应该比“阴性对照组”亮很多。

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问高通量测序甲基化修饰的问题

你好几和户

m6A RNA甲基化建库测序的原理是通过抗体特异性结合m6a修饰位点，再通过免疫共沉淀反应将m6a RNA甲基化片段富集，再进行建库测序即可完成在全转录组范围的m6a位点检测。宏基因组不包含对某个特定微生物种群的靶向，即不会对微生物特定种群进行单一性测序（真菌、细菌或者病毒），而是所有微生物基因组的总和。

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问跑完电泳后缓冲液为什么不是均匀的烫

Eason老歌迷

是不是电流太大了，导致的电泳液很热?我们一般温度都不高啊。

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问请问抗体需要现定制，没有成品的，可靠吗？

Eason老歌迷

是的，我们实验室有几个抗体就是这样的，你只要找的公司靠谱就可靠。

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问LDH凋亡

你好几和户

1、LDH基质液的配制，2、靶细胞的传代（YAC-1细胞）3、脾细胞悬液的制备（效应细胞）4、NK细胞活性检测这些步骤

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问求助：为什么肺损伤模型小鼠体重一直下降？

麻黄连翘赤小豆

小鼠体重太轻了，耐受性降低，损伤模型就是会掉体重，术后的护理也很重要

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问求助引物设计实验中要找细菌的特征性序列的步骤

Topmicro

你所说的细菌特征性序列是指特定种属还是特定菌株？特定种属的话可以直接找论文看大家用的比较多的。特定菌株的得需要全基因组测序你自己比对查找了。

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问求助，想原核表达溶菌酶基因，该选择哪种类型的BL21感受态？

Eason老歌迷

原核表达溶菌酶基因可以选用dh5a，因为dh52是用于克隆的，构建质粒，建库，保藏质粒。

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问求助 SH-SY5Y细胞系

Eason老歌迷

我有。sh—sy5y细胞系又叫人神经母细胞瘤细胞。据报道，该细胞的密度可高达1×106 cells/cm2，具有中等水平的多巴胺β羟化酶的活性。

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问求助🆘

你好几和户

小鼠中枢神经系统存在多种巨噬细胞，有小（神经）胶质细胞（CD11b+CD45lowF4/80+）和单核细胞衍生的巨噬细胞（CD11b+CD45hi）。单核细胞衍生的巨噬细胞继续细分的话，包括：血管周围巨噬细（CD11b+CD45hiF4/80+CD163+CD206+）脑膜（CD11b+CD45hiF4/80+CD163CD206+）脉络从巨噬细胞（CD11b+CD45hiCD163-MHCIIh

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问双荧光素酶实验问题求助！

你好几和户

最经典的仪器就是Promega的GloMax 20/20 发光检测仪，但这种仪器只适合一次检测。但也可以用多功能酶标仪来检测啦。

2 回答688 围观

问关于人T细胞的Transwell实验

Eason老歌迷

之前做过。在文章中总看到用染结晶紫的方法和对下室的细胞计数这两个办法，但是师兄让我选的是对下室细胞计数，我觉得实验结果还可，你可以试一试。

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