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(求助)WB条带分析
麻黄连翘赤小豆
封闭没封好,都是奶粉颗粒一抗特异性不好,建议选择单克隆抗体
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问
这是我跑的ERK和p-ERK,是要加大蛋白上样量吗,还是减少?
balalaLy
蛋白量没有问题,增加点可能更好。条带有点弥散,可以用好一点的loading
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问
为什么ttc染色总是出现一面泛白,一面玫瑰红加白色病灶
Eason老歌迷
是不是没染均匀啊?然后你的TTC溶液最好现配现用,缓冲液可以用配好的。而且染色时必须避光,必须37℃温孵。
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问
qPCR怎么会有这种扩增曲线?
秋秋欣欣
机器没问题的话,应该是环境有污染了,或者你的试剂有污染
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问
提取RNA扩增后质控起不来内标也起不来
Topmicro
检查一下用的引物是不是有问题。
4 回答
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问
关于免疫细胞培养的问题
麻黄连翘赤小豆
这是贴壁细胞,可以胰酶消化,但要注意消化时间,细胞株的话消化1-2分钟,原代的话就要消化久一点
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问
免疫组化一抗稀释液
bocardio5927
同一试验尽量选择同一种,减少实验误差,毕竟如果实验结果不稳定,找原因也是很麻烦
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问
有人遇到杂志需要提供使用动物的知情同意声明吗?
Topmicro
写明来源还有提供伦理证明应该就可以了。
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问
慢病毒感染huh7细胞
Eason老歌迷
病毒不能在光学显微镜下看见。病毒都没有细胞结构,而且比细胞小的多,只能用纳米来表示他们的大小。病毒不能独立生活,必须生活在其他生物的细胞内。
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问
关于IL-2冻干粉的处理
麻黄连翘赤小豆
可以直接加入培养基,但之后需要进行超声如果溶解不了的话。加BSA保存还是要看说明书,每个商家可能保存条件不一致
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问
求助hp相关胃粘膜肠化模型的建立方法
Eason老歌迷
我自己之前做的时候,参看的这篇文献”实验动物胃粘膜肠化生模型的建立及其应用”
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问
求助:小鼠MACO手术相关技巧:
Eason老歌迷
我个人觉得,用Zea longa基础上改良的颈内动脉线栓加环扎法制作的大鼠脑缺血模型成功率高,症状明显。大鼠清醒后出现同侧Horner征(梗塞灶同侧瞳孔缩小,眼裂变小,眼球内陷)、向对侧转圈爬行、提尾向对侧旋转、提尾倒立时对侧前肢屈曲者为造模成功。可用于大鼠脑缺血再灌注损伤的科研实验。你要是操作的话,一定要注意线栓头要圆滑,大小合适,建议用玻璃胶头。显微镜下实行手术应注意手法轻重,避免损伤血管造成
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问
BALF
Eason老歌迷
灌洗0.5ml,三次。用12号灌胃针。
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问
二氢辜酮混匀
Eason老歌迷
如果说混玉米油比较难,可以将二氢睾酮放入乙醇中溶解。
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问
请问泛死亡用αtubulin作内参可以吗
Eason老歌迷
可以的,我们实验室总在用tubulin当内参。
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问
免疫组化,细胞核膜糊,对比不鲜明,有什么解决办法
Eason老歌迷
要是细胞核模糊,对比不明显。建议是组织离体后尽快固定, 组织块大小为15×15×5mm,切开固定效果好。固定液以10%中性福尔马林缓冲液为佳。固定时间在4h-24h之间,长时间固定会影响抗原决定簇的暴露,产生阴性结果。固定液的量要超过组织体积5倍以
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问
请问肾脏组织做流式细胞术样本怎么处理呀?怎样制成单细胞悬液?
Eason老歌迷
选取合适的肾脏组织。选好的酶溶液1~2ml加入盛有被消化组织的试管中。 常规消化20~30min(恒温37℃或室温),消化期间间断振荡或吹打。 终止消化,收集细胞悬液,以300目尼龙网过滤,除去细胞,低速离心除去细胞碎片。加入PBS2ml充分混匀,离心弃掉上清。再加入0.5mlPBS重悬细胞。将制备好的单细胞悬液进行荧光标记后上机检测或保存备用。
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问
免疫组化,中间和边缘染色深浅不一,什么原因呢!
Eason老歌迷
有可能是你蜡圈画的太小,显色液覆盖的面积不过大而产生了边缘效应。最外侧的组织片最好离显色液外缘0.5 cm。
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问
免疫组化,抗原阳性检测率及着色很弱,什么原因呢?
Eason老歌迷
你可以先确认是否忽略了应该加的某种试剂,包括一抗、二抗、三抗及底物等。 确认所有的试剂是否按正确的顺序加入,是否孵育了足够的时间。对照抗体的标签确认是否使用了正确的抗体,以及所用的检测系统是否和一抗匹配,这一点是非常重要的。检查标本的储存条件,最好用已知阳性的标本来同时做阳性对照。
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385 围观
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问
免疫组化,组织出现异染,什么原因呢?
Eason老歌迷
有可能是抗体的问题,比如说用了非特异性抗体,也可能是苏木素染的不好。
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