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科研学霸天团,48小时有问必答
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Elisa实验包被抗原,封闭之后可以保存板子下次再用吗?
府宅
37℃的条件下放置15天都没有很大的影响,关键要看包被的原料稳定性
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问
显微镜拍照问题
balalaLy
就是先拍一张低倍的照片,一般4x或者10x,然后再在低倍照片中找一个视野就是框出来的位置,拍一张高倍的40x倍或者100x照片
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问
wb样本孔白色条带 marker是黑色的
麻黄连翘赤小豆
看样子是“反影”现象,可能是信号太强,就像是照相的时候曝光过度了,建议提高一抗和二抗的稀释倍数,缩短抗体孵育时间,如果是用ECL化学发光液的话换成低敏的会改善这种现象
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问
目的蛋白表达破碎时用pbs表达在沉淀,换成buffer a蛋白又表达在上清是为什么呢
冷泉港蛋白
1.纠正下 不是蛋白表达在上清还是沉淀,是溶解,我感觉这样说更合适2.你的蛋白应该是疏水性较强,以包涵体的形式存在,简单的说就是形成了多聚体。3.用pbs溶解不了蛋白,因此在沉淀里面;用buffer a,含有变性剂或表面活性剂,破坏了蛋白之间的疏水作用,溶解了部分蛋白出来。
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问
琼脂糖电泳跑出的条带怎不是那么好看,谁有高招?
锟1112
充分融化琼脂糖,提高浓度,降低电压,把染料加在产物里(部分染料可用)
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问
co ip反向互作做不出来怎么解决
illusio
可能是B的抗体不好用,也可能是两者确实有结合,只是B蛋白的抗原表位被复合物掩盖,可以尝试使用强度高一点的裂解液,破坏部分的空间构想,再试一次
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问
弥散性糖基化蛋白纯化后大小变了
illusio
有可能是蛋白降解了,蛋白降解了会出现多带现象,或者蛋白有其他修饰形式比如甲基化、磷酸化
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问
非预染marker如何染色
illusio
考马斯亮蓝染色后不能再转膜,实在想看条带的位置的话,可以将胶上的Marker切下一半先考马斯亮蓝染色,然后根据考马斯亮蓝染色的结果定条带位置,染色后胶的大小虽会变化但变化不大。
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问
是引物二聚体吗
idiotOC0P
最下面那坨边缘不清晰的是引物二聚体
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问
H9C2心肌细胞提RNA做QPCR内参选择
illusio
β-actin作为mRNA检测内参基因的范围比较广泛(除心肌,骨骼肌,平滑肌,特定肿瘤和组织之外);广泛用做western内参;GAPDH由于受代谢及影响因素较多,一般不用mRNA检测内参,广泛用做western内参。 有文献H9C2心肌细胞用以β‑tubulin为内参。可以多去看一下文献
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问
小鼠mcao后易死亡
Eason老歌迷
有几个原因,一个是麻醉不能过深,不然在分离颈总动脉,牵拉迷走神经和气管时,动物易死亡。二个是如果插线有困难,勉强进入后,动物损伤重,易死亡。
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问
救命!检测活性氧ROS为啥对照组特别亮啊
周末也要努力呀
你用的哪家试剂啊?不同厂家有些不稳定
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问
RT-PCR实验内参问题
illusio
可能第一遍的时候RNA降解严重,或者逆转录失败
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问
请问烟草注射农杆菌瞬时表达的T-DNA整合进基因组么?
Eason老歌迷
有,我之前看过一篇文章,“农杆菌介导的基因瞬时表达技术及其应用”,讲的很详细。
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问
如何快速得到芯片探针与gene的对应关系,并将探针转换成基因?
申东熙老伯
芯片探针与基因的对应关系可以直接去做的公司官网下载。
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问
师姐构建的Bacmid(重组杆粒)只剩下10微升左右,老师跟我说可以重新转
Eason老歌迷
是不是你转化的过程,哪一步没做好啊?之前师兄转化时间没掌握好,也是啥也不长。
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问
以某种项目的定量结果为因变量,分析该变量用于某种疾病诊断的影响因素,如肝肾功能、是否服药、标本是否溶血等,应使用哪种分析方法?谢
Eason老歌迷
可以用单因素风险分析,比如说做一个森林图,看它的置信区间。
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问
两个基因的相关性怎么看?
申东熙老伯
看图片上的P值,P值越小说明相关性越好。
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问
IL-2增殖,一定要用ConA吗,不能直接加工程菌产的IL-2做实验吗
陈文豪平邑
不一定,直接加工程菌产的lL-2.EdU是我们检测细胞增殖的最新技术,灵敏度、精度等都要比以前的好得多!而且操作简单、方便,没有任何毒性,可以用于几乎任何增殖、周期相关的体内试验和细胞试验!
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问
小鼠给药后活力下降,出现攻击行为
任医生168
与药物有关吧!药物的化学成分、浓度、注射速度,部位有关。
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