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        悬浮细胞甩片做免疫荧光染色

        相关实验:细胞免疫荧光

        user-title

        dxy_3arf99k6

        第一次做细胞免疫荧光染色,在共聚焦显微镜下找不到细胞(普通显微镜下能看到),只能看到一些杂质,用的是甩片的方法做的,加了封片剂后放了盖玻片,今天查了一下发现共聚焦显微镜要求盖玻片厚度在0.17mm左右,考虑是不是用的盖玻片太厚了,所以找不到细胞,有小伙伴遇到过这种情况吗(做一次成本有点高,不敢轻易去尝试了)

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        3 个回答

        user-title

        yanlai000

        有帮助

        普通显微镜下可以看到的话那可能是共聚焦显微镜使用不熟练导致,共聚焦的Z轴比较精准,先低倍在白光下找到细胞,然后再高倍找,找到细胞后再打开激光观察,注意记录Z轴的数值方便下次快速聚焦

        user-title

        Dr_劉医生

        有帮助

        盖玻片厚度的可能性不大,还是爬片贴壁的问题。爬片,一定要注意密度密度!!细胞不能太多,连成一片那种细胞很容易在 PBS 漂洗步骤大片脱落。其次细胞也不能太少,这样细胞也会被洗掉,拍照效果不理想。正常的细胞密度最好在 60-70% 左右即可,在显微镜下可以看到细胞一个一个的形态。有些细胞不容易贴在玻片上,会导致细胞形态和培养瓶内不一致,可以用明胶或多聚赖氨酸预处理一下玻片,再接种细胞即可;

        user-title

        bamboopiggy

        有帮助

        对于悬浮细胞做免疫荧光,你最好加促贴壁试剂,把细胞贴盖玻片上,然后进行操作比较好。

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