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问
求助:WB转膜(0.45)后MARKER变淡很多
dxy_ql0su1t7
分子量大的蛋白和marker需要转时间更长才能到膜上,0.22的膜孔小,适合小分子蛋白转膜,如果有大分子和小分子同时转膜建议分开转
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问
wb内参无条带
哎呀呀呀呀哎
抗体用的对吗?一抗为啥抗鼠呢,是不是应该用抗β-actin的抗体,如果抗体用的没错,建议你换个抗体试试,抗体效果好不好在很大程度上影响实验结果
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问
far western blot的marker跑出来只有一条条带怎么回事啊?
dxy_ql0su1t7
上样的样本是否经过反复冻融?是否有降解?可能需要新的样本来重复实验
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问
PCR的对照组和空白组有什么区别?
申东熙老伯
对照分为阴性对照和阳性对照。空白对照是阴性对照的一种,指把样品换为水。阳性对照是指一定可以P出来的,结果可信的对照。
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问
有没有什么办法能够去除培养基中的LPS,又不影响实验结果啊
dxy_gwrp7ndq
(1) LPS分子量大于1万, 依据这个特点, 研究者建立了以下几种方法:超滤:选用合适的超滤膜可以将溶液中的LPS完全去除, 适用于目标产物分子量小的溶液。密度梯度超离心:根据LPS与溶液中蛋白质的密度、沉降系数等差异, 利用蔗糖密度梯度超离心的方法来分离除去LPS。然而因LPS不同的存在形式, 分子大小、密度、沉降系数的不同, 此方法应用受限。活性炭吸附:适合于组分较为简单的小分子的溶液中或水
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问
这个是引物二聚体吗,cDNA,引物刚用过,pcr程序一样的,没问题,是什么操作还是其他原因导致的吗
bamboopiggy
不管是不是引物二聚体,这个数据不能用。你提的rna的质量如何?还有你反转的cDNA是第一次用么?如果是第一次用可能是cDNA质量不好。
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问
慢病毒转染和腺病毒转染有什么区别?
哎呀呀呀呀哎
1.慢病毒需要vector+包装系统2.adv包装病毒基因组游离于宿主基因组,瞬时表达慢病毒基因组可以整合到宿主基因组上,可长时间稳定表达外源gene3.慢病毒高免疫原性,腺病毒低免疫原性
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问
蛋白免疫印迹实验目标蛋白和说明书上的分子量差异很大怎么办?
dxy_ql0su1t7
可能有多个转录本,如果多次跑出来的都是一个分子量的话建议按照实际操作出来的分子量为准
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问
石蜡切片烤片时老是有气泡怎么处理?
府宅
捞片后没有充分晾干就直接把切片平放在摊片机上摊片,55度时,水蒸气受热挥发不充分在组织内形成气泡。 把水晾干后再放摊片机上摊片或者烤片就不会有气泡了。
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问
小鼠肺组织蛋白提取?
bamboopiggy
不锈钢珠是提蛋白的,氧化锆珠是提rna的,一般是1ml,加一大两小3个珠子。
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问
蛋白表达
bamboopiggy
你有没有跟beads结合以后的?上清中有,并不代表bind下来的就多啊。你先看看beads能binding下来多少
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问
有用cst的p62抗体跑出来条带的大神吗
bamboopiggy
我用过,cst的p62 很好用啊,我是300mA,转了2小时。
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问
我的PCR内参有CT值,目的基因测不出CT值,请问是什么原因(有图)
Topmicro
你查到的是对的,重新设定一下阈值看看,就是将选取的荧光强度调高。
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问
转染实验开始前,需要对转染试剂本身对细胞活性的影响进行检测吗?
bamboopiggy
如果第一次用,还是检测一下比较好,否则正式开始实验了,如果有问题,就会措手不及。虽然一般转染试剂的毒性都不是太高。
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问
请问大佬,我做自噬相关的通路
bamboopiggy
你敲除A,自噬升高,说明A是抑制自噬的,你加入自噬抑制剂,如果在A的上游,那可能A有改变,否则不会有改变
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问
特异性基因敲除鼠鉴定问题
bamboopiggy
你cd4上的特异性敲除,用鼠尾是鉴定不出来的(只能鉴定出是f/f,还是f/+,没法鉴定是否敲除了),你最好直接拿你跑wb的组化,取一部分进行鉴定。
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问
求助 | 大鼠灌注的时候灌pbs的时候流速先快后慢,对结果有啥影响,是哪里出问题了呢
bamboopiggy
可能是哪里堵了,如果pbs灌注不充分,会有血液残留,影响将来的组化结果。
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问
求助,western
申东熙老伯
可以看出膜上应该是有条带的,机器是不是之前有人用得很久,看起来应该是机器有问题没把条带发出来。
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问
药物浓度越高,OD值越高
Topmicro
cck8实验一般不需要清洗,考虑一下你用的药物会不会对CT值造成影响,做不放细胞只放梯度药物的孔试一下。
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问
利用CRISPR进行基因敲除能不能敲除第一个外显子即ATG所在的外显子
bamboopiggy
这个技术上是可以敲掉的,但是一般进行基因敲除会从二号外显子开始进行。
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