求助：WB转膜（0.45）后MARKER变淡很多
dxy_zja1h0q
楼主做wb很久了，之前一直很正常，（这里是指0.45的膜）从某一次起就不正常了，转膜后marker变得很淡，尤其是180-95那三条带，特别特别浅。曝光倒也有带，但总觉得是比正常该有的要少了。、
也看了很多帖子，我的转膜液里没有sds，膜用之前甲醇浸泡激活了，全程冰敷低温，试过不同的转膜条件，90v 90min，100v 65/80/100min等等，跑出来效果都差不多。但有时候我同时转两张膜，另一张是小分子，用0.2的膜，0.2的就转的很清楚，明明都是一样的条件，有大大知道为什么吗
6 个回答
dxy_ql0su1t7
有帮助
分子量大的蛋白和marker需要转时间更长才能到膜上，0.22的膜孔小，适合小分子蛋白转膜，如果有大分子和小分子同时转膜建议分开转
bamboopiggy
有帮助
可能是你的预染marker要降解了，所以先从大的marker开始降解。过一阵，可能都看不到大的marker了。
dxy_zja1h0q
可是0.2的膜转marker很清晰呀
申东熙老伯
有帮助
条带少有两种可能，转膜时间短条带没转移过去，转膜时间长条带被转过头，如果是大条带，建议适当延长转膜时间。
府宅
有帮助
可能是Western转膜液里加了SDS，SDS是去垢剂可能会把marker的颜色洗掉
dxy_gwrp7ndq
有帮助
1、可能是转膜buffer没配好，建议重新配制一下；
2、应该继续往下做，一抗二抗以后曝光看看，有时候marker很淡但蛋白条带很清晰，这种情况也是有的
whilt-shirt
有帮助
有可能是转膜时没有夹紧导致的。
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