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        求助:WB转膜(0.45)后MARKER变淡很多

        相关实验:蛋白质免疫印迹(Western Blot,WB)

        user-title

        dxy_zja1h0q

        楼主做wb很久了,之前一直很正常,(这里是指0.45的膜)从某一次起就不正常了,转膜后marker变得很淡,尤其是180-95那三条带,特别特别浅。曝光倒也有带,但总觉得是比正常该有的要少了。、

        也看了很多帖子,我的转膜液里没有sds,膜用之前甲醇浸泡激活了,全程冰敷低温,试过不同的转膜条件,90v 90min,100v 65/80/100min等等,跑出来效果都差不多。但有时候我同时转两张膜,另一张是小分子,用0.2的膜,0.2的就转的很清楚,明明都是一样的条件,有大大知道为什么吗

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        6 个回答

        user-title

        dxy_ql0su1t7

        有帮助

        分子量大的蛋白和marker需要转时间更长才能到膜上,0.22的膜孔小,适合小分子蛋白转膜,如果有大分子和小分子同时转膜建议分开转

        user-title

        bamboopiggy

        有帮助

        可能是你的预染marker要降解了,所以先从大的marker开始降解。过一阵,可能都看不到大的marker了。

        user-title

        dxy_zja1h0quser-title

        可是0.2的膜转marker很清晰呀

        user-title

        申东熙老伯

        有帮助

        条带少有两种可能,转膜时间短条带没转移过去,转膜时间长条带被转过头,如果是大条带,建议适当延长转膜时间。

        user-title

        府宅

        有帮助

        可能是Western转膜液里加了SDS,SDS是去垢剂可能会把marker的颜色洗掉

        user-title

        dxy_gwrp7ndq

        有帮助

        1、可能是转膜buffer没配好,建议重新配制一下;

        2、应该继续往下做,一抗二抗以后曝光看看,有时候marker很淡但蛋白条带很清晰,这种情况也是有的

        user-title

        whilt-shirt

        有帮助

        有可能是转膜时没有夹紧导致的。

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