我的PCR内参有CT值，目的基因测不出CT值，请问是什么原因（有图）

相关实验：反向 PCR （inverse-PCR）

大楽sayuri

2022-08-23

跑了一次PCR，内参CT值平均为19，但是目的基因测不出。不知道是什么原因，查了网上说是可以改一下基线阈值，但也不知道该怎么改。看扩增曲线感觉目的基因扩增效率不如内参，但是也不至于测不出CT值，感觉也没有低于15，实在想不出是什么原因了TAT。

扩增曲线如下（红黄线的是内参，蓝绿线的是目的基因）：图片描述

图片描述

溶解曲线也都是单峰，图如下：

图片描述

3 个回答

Topmicro

2022-08-24

有帮助

你查到的是对的，重新设定一下阈值看看，就是将选取的荧光强度调高。

Eason老歌迷

2022-08-23

有帮助

这种情况下你通常也会发现由于阀值位置不正常正常导致荧光阈值线与扩增曲线的交点。出现这种情况，如果扩增模板浓度是正常的，那么多数原因可能是由于系统界面参数设置错误所导致的。如果参与扩增的模板并非所有的孔，而系统界面在所有的（C-H行）都默认设上了target和 sample参与CT值计算。这个时候系统会默认所有孔参与荧光定量 PCR实验。导致CT值错误。如果我们把无样品C-H 行数的target和sample 前面的“√” 清除后重新分析计算，就会得到正常的荧光阈值线 CT 值了。