实验问答

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科研学霸天团，48小时有问必答

全部

细胞

问PCR扩增不出来，该怎么改进？

土井挞克树

先排除一下降解问题，感觉是降解的原因所以扩增不出来

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问蛋白质培养过后，蛋白质盐析的复原。

高山云初

注意蛋白质盐析后保管的环境，避免受热、紫外线、 X 射线、强酸、强碱、重金属（如铅、铜、汞等）盐、一些有机物（甲醛、酒精、苯甲酸）等。

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问构建pre-miRNA过表达载体问题

高山云初

萤火虫荧光素酶基因和海肾荧光素酶基因，基因用LUC和pmirG没有什么区别。

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问有人造NEC模型吗？可否交流一下。

高山云初

NEC的发病机制并不清楚，最令人困扰的是到目前为止NEC没有特异性的治疗方法，是一个难题。

4 回答509 围观

问小鼠肾组织col i只有血管旁有显色是什么原因？

土井挞克树

染色的染剂时间不足，或者组织固定不足

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问为什么跑完蛋白总是靠近浓缩胶这一半胶脱不了色

huarenqiang5

考虑胶的浓度过高，建议降低浓度。

4 回答855 围观

问组织蛋白酶酶切趋化因子实验步骤怎么做啊？？大家

周末也要努力呀

组织蛋白酶酶切趋化因子实验一般分为以下几个步骤：1. 提取趋化因子：从细胞培养上清液或组织中提取趋化因子。2. 纯化趋化因子：通过某些分离纯化技术，如离子交换层析、凝胶过滤层析等，将趋化因子纯化。3. 制备底物：制备含有趋化因子底物的凝胶，如聚丙烯酰胺凝胶。4. 酶切实验：将纯化的组织蛋白酶加入含有趋化因子的凝胶中，进行酶切反应。反应后，观察凝胶中的趋化因子是否被酶切分解，从而判断组织蛋白酶对趋化

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问关于细胞划痕能否预处理的问题

feixue7758527w

我觉得是可以的，预处理一下还是可以的，但是要注意细胞的状态和干预情况。

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问为啥我的co-ip阴性对照有条带呢？

龙大人驾到

如果在共免疫沉淀（Co-IP）的阴性对照组中观察到条带，可能存在非特异性结合的情况。这种非特异性结合可能是由于实验条件、试剂或样品中其他成分引起的。以下是一些处理非特异性结合的常见方法：1. 优化实验条件：确保使用正确的缓冲液、温度和pH值等实验条件。适当的优化可以减少非特异性结合。2. 阻断剂：添加合适的阻断剂可以降低非特异性结合。常用的阻断剂包括非特异性蛋白质（如牛血清蛋白、鱼胶等）或非特异性

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问家人们有没有DSS灌胃造模溃疡性结肠炎成功的案例，大家都是配的多少的试剂，每天灌胃多少呀，要分几次灌

高山云初

急性DSS结肠炎模型Day1：称重并标记各组C57BL/6小鼠。待造模小鼠饮用3-5% DSS水溶液，未处理组小鼠饮用正常水。Day3：给予待造模小鼠更换新鲜3-5%DSS饮用水。Day5：给予待造模小鼠更换新鲜3-5%DSS饮用水。Day8：给予待造模小鼠更换新鲜不含DSS的饮用水。慢性DSS结肠炎模型Day1：称重并标记各组C57BL/6小鼠。待造模小鼠饮用1-3% DSS水溶液，未处理组小鼠

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问单体化合物的药代动力学研究

高山云初

当然可以，只是需要找到新的结合点

4 回答338 围观

问求助大神:透射电镜下的烟草线粒体，左图是对照，右图是实验组，发生了什么变化，请各位大神帮忙解答一下，有点着急，谢谢。

周末也要努力呀

线粒体空泡化和脊断裂，与对照组相比而言

3 回答343 围观

问southern blot 出现这种情况是什么原因？

feixue7758527w

背景很脏，没有明确的条带，原因很多，首先你的蛋白提取可能不是很纯，然后抗体是不是有问题，我觉得抗体的可能性很大。其次就是封闭的牛奶是不是不太好。这几个方面建议再推敲一下。

4 回答356 围观

问想问一下线粒体、内质网、溶酶体这三个细胞器在正常细胞中的细胞器粘度是多少啊，病变的细胞中粘度为多少？

周末也要努力呀

正常细胞代谢过程中的细胞粘度是一个动态的参数，不仅受细胞器的存在和状态影响，还受到细胞的环境和调节的影响。因此，很难给出线粒体、内质网和溶酶体在正常细胞中的粘度具体数值。线粒体、内质网和溶酶体都属于细胞的重要细胞器，它们的结构和功能对细胞的正常代谢至关重要。细胞粘度主要由细胞质中的黏性物质（如细胞器、细胞骨架、细胞器膜等）影响，而这些物质的浓度和特性会因不同细胞类型、发育阶段和环境条件而有所变化。

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问有同学和老师在c2c12细胞上诱导弓形虫速殖子形成包囊吗？求大神指导步骤。

周末也要努力呀

培养C2C12细胞：首先，将C2C12细胞在合适的培养基中培养至适当的生长状态。确保细胞的健康状态和适当的细胞密度。弓形虫感染：将经过培养并达到适当密度的C2C12细胞与具有速殖子能力的弓形虫（例如T. gondii RH株）接种。接种时，将弓形虫接种在C2C12细胞培养基中，细胞和弓形虫的比例根据实验需求设置。感染后培养：将感染的细胞在37摄氏度的培养箱中继续培养。弓形虫将在细胞内生长和繁殖，并

3 回答292 围观

问荧光定量PCR不起峰

周末也要努力呀

低模板浓度：如果反应混合物中的DNA模板浓度过低，可能无法产生足够的产物来产生荧光信号。这可能是由于样品中的DNA含量过少或提取和纯化过程中的问题。非特异性扩增：由于引物的选择不当或非特异性扩增的存在，可能导致在qPCR过程中产生多个扩增产物。这些产物可能不会产生明显的荧光信号，从而导致缺少清晰的PCR峰。引物设计问题：如果引物的设计存在问题，如引物序列与目标序列的互补度不足、引物长度不合适或引物

3 回答1318 围观

问怎样肉眼估计培养皿中细胞密度百分比？

qtt0208

看视野中细胞与空白的占比，细胞占满一般视野就是50%，这个是大概值，如果要准确值还是建议消化下来混匀后用细胞计数板或者细胞计数仪

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问肠类器官培养总是失败

刘小畅FV4X

同学你好，请问你现在培养有好转吗? 我遇到的问题和你类似，苦恼中…

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问牙囊细胞培养求助

土井挞克树

这个不是牙囊细胞，细胞团可能是炎性细胞

4 回答241 围观

问IP的阴性对照组IgG中出现了目的条带，是我提的蛋白不纯吗，还是其他地方出了问题

米米米小喵

加入的A蛋白抗体和IgG 抗体，在最后一步的煮样中，被β巯基乙醇破坏了结构，变成了重链和轻链，随后由于A蛋白抗体和你的B蛋白抗体种属来源相同，又被你的B蛋白抗体识别出来，所以显影就出现了条带。

6 回答11063 围观

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