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        RNA scope染不出目标探针,不知道怎么回事

        相关实验:用T4 RNA 连接酶连接 RNA 分子

        user-title

        亮婆婆

        DRG组织做了RNA scope,染不出目标探针,图1阳性对照探针,图2是阴性对照探针,图3是目标探针。目标探针没什么阳性信号。目标基因q-PCR跑出来CT25左右。wb和IF也能做出来。但怕IF抗体特异性不好买了scope,结果根本染不出来,不知道哪里出问题了图片描述图片描述图片描述

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        3 个回答

        user-title

        huarenqiang5

        有帮助

        由于样本本身制备过程中未按照标准流程,固定不充分,导致RNA大幅度降解,故无法检测到靶探针信号。

        user-title

        土井挞克树

        有帮助

        考虑是rna降解的可能性高,降解了所以看不到染色

        user-title

        高山云初

        有帮助

        1.样本处理问题:样本处理过程中可能存在破坏RNA分子的情况,如过度切片或超声波破碎等。此外,如果样本冷冻或固定的时间太久,也可能导致RNA分子的降解。

        2.RNAscope实验操作问题:实验过程中可能存在RNA适配体和探针的浓度不足、杂交温度或时间不当等问题。

        另外,使用的探针可能不够特异性,也可能导致信号不明显。

        3.仪器问题:如果使用的显微镜或成像系统设置不当,也可能导致信号不清晰或无法观察到。

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