实验问答

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科研学霸天团，48小时有问必答

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问96孔板换液后孔边缘细胞被吹掉了怎么回事？突然就发生了这种情况，之前从来不会这样子，求助？

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可能是弃液的时候枪头吸力导致的，可以采用直接甩或拍打的方式弃液

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问求助！同源重组构建质粒连不上，求助各位大佬帮忙分析改进一下！！！

dxy_mr5l599

1、确定一下同源重组酶要求的最小同源重组碱基数是否符合要求2、确定一下同源重组部位的退火温度是否高于同源重组时所需要的温度3、确定酶切的载体片段大小是否正确，以及最好需要单独把载体片段回收（使用NEB重组酶时，此酶还具有连接酶功能）4、确定目的片段大小是否正确5、根据说明书要求的比例使用相应量的载体和目的片段6、同源重组后尽量短时间内进行转化，避免同源重组产物反复冻融7、检查抗性基因与平板的抗生素

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问求助怎么看小鼠PBMC

dxy_s1v2ced7

“小鼠 PBMC 培养后细胞鉴定，光靠形态学观察确实难精准判断～像你说的小圆细胞，T 细胞、B 细胞等淋巴细胞形态都接近，亮亮的可能是死细胞（凋亡后折光性变化），也可能是活化细胞的特殊形态。要是想精准区分细胞类型，荧光标记+高灵敏度显微成像是常用思路！这里就得提到光电倍增管（PMT）啦～比如用滨松 PMT 的显微镜成像系统，能把荧光信号‘放大捕捉’，哪怕微弱荧光标记（像 T 细胞特异性

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问WB检测膜蛋白无条带？

bamboopiggy

蛋白质不是一般95-100度煮10min就可以了，再说你37度也煮不开啊，这个就跟煮鸡蛋一样。

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问卡那霉素抗性基因的启动子是什么呢？

土井挞克树

建议你去ncbi网站上进行搜索。输入卡那霉素然后搜索启动子

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问为什么血球计数板在光学显微镜下这么不明显有什么好的办法么

dxy_s1v2ced7

“血球计数板显影不清，除了调节物镜、滤光片，光电探测组件的性能也关键！比如显微镜成像系统里，光电倍增管（PMT）负责把光信号转化、放大，像滨松PMT，低光环境下也能精准捕捉微弱信号，让网格、细胞轮廓更清晰～要是你在显微计数时总被‘看不清’困扰，或者想升级设备光电探测能力，滨松PMT的高灵敏度特性，说不定能解决问题，欢迎聊聊你的实验细节呀～”

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问求助怎么看HE染色炎性浸润

静心观照

HE 染色，即苏木精一伊红染色法，苏木精染液为碱性，主要使细胞核内的染色质与胞质内的核糖体着紫蓝色；伊红为酸性染料，主要使细胞质和细胞外基质中的成分着红色。 HE 染色后是可以观察炎症细胞及其他细胞的存在情况，因为炎症细胞有自身的特点，通常细胞核较大，核质比大， H & E 染色后，细胞核被苏木精染成鲜明的蓝色，细胞浆被伊红染成深浅不同的粉红色至桃红色，胞浆内嗜酸性颗粒呈反光强的鲜红色。因

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问天狼星红染色和massion染色的区别是什么？在用途上

dxy_sjt7bpgr

一、染色原理与显色效果天狼星红染色原理：天狼星红是一种强酸性染料，通过静电作用与胶原纤维中的碱性基团（如赖氨酸、羟脯氨酸）结合。染色后，胶原纤维呈红色，肌纤维呈黄色，细胞核通常用苏木素复染呈蓝色715。显色特点：在偏光显微镜下，胶原纤维可呈现双折光现象（Ⅰ型胶原呈黄色或红色，Ⅲ型胶原呈绿色），从而区分胶原类型1015。Masson三色染色原理：通过多种染料组合（如酸性品红、苯胺蓝）对不同组织成分进

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问双荧光素酶插入启动子之后荧光比空载低

dxy_s1v2ced7

“双荧光素酶实验荧光值异常，常见原因给你列几个方向： 1.启动子/载体因素：截短后的启动子活性弱，或者载体构建有干扰（比如启动子和空载序列重叠），都可能让荧光变低；也得检查质粒质量、转染条件是否一致～ 2.实验操作细节：荧光素没避光保存、裂解液处理不彻底，会影响信号；另外，荧光信号的采集检测也超关键！要是仪器的光电探测‘不给力’，微弱荧光抓不住，结果也会偏差～像滨松 PMT 这类高灵敏度组件，能

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问被盛有完全弗式佐剂的注射器扎出血了有影响吗？需要做什么处理

小白在行动

我朋友（女，已婚，35）被扎了，简单挤了一下，没做别的处理。被扎部分一直轻微疼痛，两周后手指碰到粘合剂（某种胶），逐渐出点掉皮，瘙痒，红肿，疼痛现象。看过外科和皮肤科，只给了药膏涂抹处理，只能缓解疼痛，现在一个月了，还没好。请问各位老师有好的处理方式么，或者挂哪个科室较合适。

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问自己做CRISPR-Cas9的话是不是很困难？

sswei

做CRISPR-Cas9学校没只能外包，敲除一个基因对有这技术的公司不是个难题。

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问EMSA实验一直堵孔

dxy_s1v2ced7

“EMSA 堵孔确实头疼！常规思路会从探针、配胶找原因～另外，要是实验涉及荧光成像/信号采集，光电倍增管（PMT）的性能也会影响结果！比如滨松 PMT，能精准捕捉微弱荧光信号，让条带成像更清晰，减少‘假阴性’干扰。要是你在优化实验时，发现成像环节总拖后腿，试试从光电探测组件升级入手，说不定能解决问题，欢迎聊聊具体实验细节呀～”

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问WB上样量从18-60ug内参都非常浅（中性粒细胞）？

bamboopiggy

感觉还是你中性粒细胞裂解不够的问题，你增大一下裂解液的体积看看，尽量减少沉淀，然后再做wb

4 回答423 围观

问小鼠腓肠肌HE病理切片观察

johnwen1958

肌纤维切片厚度问题，会出现切出来肌纤维有明显裂纹。可以用 Image J 软件来算横截面积。

5 回答2952 围观

问［求助］电转化感受态细胞的制备

dxy_2m9ohu3

你好，请问你后面解决电转的问题了吗？

5 回答1965 围观

问模型组内参和目的基因呈等比例改变

dxy_v06fr6k2

换内参，OGD后actin会改变

4 回答494 围观

问S1-PFGE 哪位大神可以告诉我是什么原因导致条带这个样子吗？

无所不至

我现在做实验也是marker有条带，S1酶切没有条带

4 回答511 围观

问WB的上样质量一般是多少

Gx41

30-60ug，根据目标蛋白量调节

13 回答13812 围观

问以质粒为模板的pcr克隆线性化载体pcr不出来怎么办

天一湖医者

如果你以质粒为模版扩pcr,然后跑胶时还能看到质粒的条带，那说明你的模版量太大了。降低模版量至最多20ng应该可以了，一般我实验中都用1－10ng就够了，而且这还是50ul体系，如果你的体系更小，我想最多1ng就够了

4 回答5446 围观

问慢病毒感染THP-1后，细胞贴壁严重

dxy_giwowhk7

同学您好，我想问问你们现在这个问题解决了嘛？怎么解决的呀？我们现在也出现了这个问题？THP1一感染慢病毒就贴壁

4 回答2443 围观

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