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问
同源重组连接到载体,有没可能造成基因片段内部部分片段丢失。
萧莣苼
这个是有可能造成目的基因内部片段丢失的。
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问
有没有动物实验做不了的老师?
萧莣苼
动物实验不会做的人肯定有的吧。
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问
请问高效液相色谱法的加样回收率应该怎么做。
萧莣苼
你目前的方案在操作逻辑上是不可行的, 加样回收率(Spiked Recovery)的核心定义是:将已知量的标准品加入到“未处理的样品粉末”中,然后按照样品制备的完整流程进行提取和测定。 你提出的方案是将标准品加到“上清液”中,这在分析化学中称为“基质加标”或“后加标”,只能考察基质效应或仪器稳定性,无法考察提取过程(离心、溶剂提取)造成的损失,因此不能作为加样回收率。
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问
请教:HepG2细胞形态及胰酶处理方法
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问
求问各位前辈,怎样在TriZoL法提取B16F10 RNA的过程中,避免黑色素对后续检测的干扰?
萧莣苼
增加Trizol用量:黑色素含量高时,适当增加Trizol的比例,通过稀释作用降低黑色素浓度。增加离心步骤:先将细胞裂解液在4°C下12,000g离心10分钟。黑色素和细胞碎片会形成黑色沉淀,只取上层清液进行后续操作。
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问
人脂肪细胞原代培养及后续处理方案
dxy_ohhxnzh2
脂肪细胞的原代培养方法看这里:https://www.biomart.cn/lab-web/method/316rdpago2jmv.ht
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问
请教各位老师,WB实验曝光完,为啥marker那边有一个杂带是从隔壁泳道跑过来的?
萧莣苼
应该是泳道间交叉污染了吧,样本在电泳过程或转膜过程中发生了侧向扩散。可以考虑调整下:减小上样量: 你的样本条带已经明显过载(Overloaded),建议稀释后再上样,这样条带也会更漂亮,减少拖尾和串道。留出空位: 在 Marker 和第一个样本之间留一个空道,加 Loading Buffer。检查胶质量: 拔梳子要稳,确保孔壁完整。
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问
毕赤酵母蛋白表达的实验步骤有全的吗?
萧莣苼
看这里有两个操作方法:https://www.biomart.cn/lab-web/exp/316nrkago405u/316nrmigo4ka0.html
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问
哪位大神知道,Elispot实验必须用仪器检测吗,可以用倒置显微镜拍吗,审稿人会不会不认?
萧莣苼
ELISpot 实验不需要强制使用昂贵的专用全自动读板仪,倒置显微镜可以用于计数,在投稿时需要注意操作规范,以避免审稿人质疑结果的客观性,ELISpot 的标准计数方式一直包含“显微镜观察”这一选项。技术层面: 只要显微镜能够清晰显示 PVDF 膜上的斑点,并配合合适的放大倍数(通常 2x-10x 即可),就可以完成手动计数。文献支持: 许多权威免疫学实验手册(如 Protocol Exchang
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问
救救孩子吧,STZ诱导C57小鼠,给药后小鼠迅速死亡是怎么回事?
啦啦啦啦啦u
给完药后,尝试着将饮用水换成10%的蔗糖水,可以有效的降低死亡率。
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问
外泌体WB出现Grp94阳性条带和离心有关吗?
啊啊啊洛飞
Grp94 阳性通常不是 10,000×g 这一步离心的直接后果,而是整个前处理流程不彻底导致的交叉污染。
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问
SDD检测MAVS多聚体
诶哇医学僧
我最近也在做,不知道方不方便交流一下
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问
求一个类器官免疫组化/荧光的protocol?
sese0209
去基质胶(二选一):低温法:4℃传代缓冲液静置 10 min,300g 离心。酶解法:1 mg / mL Dispase 37℃ 20 min,离心。后续染色路径:整体染色(保留基质胶):直接 4% PFA 固定 → 0.5% Triton X-100 透膜 → 抗体孵育(适合 < 300 μm 类器官)。切片染色:固定后琼脂糖预包埋 → 石蜡切片(4-5 μm)→ 柠檬酸抗原修复(必须做,
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问
实验动物肝脏的拍照
baseball2007
后期PS加的,照的时候放把尺子标记
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问
跑wb制胶,为什么下层胶老是有气泡,灌了胶压了胶5分钟都没有,为什么5分钟之后下层就会有气泡
balalaLy
如果是最底下有气泡是没有影响的,如果是中间有气泡可能是玻璃板没有洗干净,灌完胶可以轻轻敲一下玻璃板,使气泡往上跑。
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问
小鼠光遗传病毒注射?正常病毒和cre病毒的区别
sese0209
后一种(双病毒 + Cre-loxP 系统)的主要优点是:使用强启动子(EF1a)驱动 ChR2,表达量更高、光遗传操控效果更好,同时可借助 Cre 依赖实现更严格的特异性和灵活性(便于与其他 Cre 品系或工具联用)。前一种虽然简单,但 VGAT1 启动子驱动效率相对较弱,可能影响实验效果。
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问
细胞缺氧复氧问题,感谢大神指点
Dr_劉医生
细胞缺氧小室换气一般10min就可以了,具体缺氧和复氧的操作可以参考下图:
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问
NCI-H716细胞分化问题
鼻涕虫大王
请问你是用哪款基质胶啊。。。。。
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问
过滤器膜是怎么选择的呢?
Wendy滕彩英
47mm在线可换膜过滤器,值得拥有
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问
WB曝光选择电子照胶仪好还是胶片曝光好?利弊分析?
蛋白赵博
胶片的做法难度大一些,但是可以长期保存 做为实验证据,安全性更好一些电子照片做法简单 适合新手小白
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