c57小鼠单个囊胚基因型鉴定怎么做？

C57小鼠单个囊胚基因型鉴定流程，供参考：

1. ‌样本采集与处理‌

• ‌囊胚获取‌：通过超数排卵（PMSG/HCG处理）和交配获得囊胚，或从代孕母鼠子宫中收集‌。
• ‌显微分离‌：在体视显微镜下用显微针挑取单个囊胚，避免滋养层细胞污染内细胞团（ICM）‌。

2. ‌DNA提取‌

• ‌裂解方法‌：
  • 碱性裂解：将囊胚直接加入25mM NaOH + 0.2mM EDTA溶液，98℃加热1小时，中和后离心取上清‌。
  • 蛋白酶K消化：若需更高纯度，可采用蛋白酶K裂解液（如Tris-HCl+蛋白酶K）56℃消化过夜，乙醇沉淀纯化‌。

3. ‌PCR扩增与电泳‌

• ‌引物设计‌：针对目标基因设计引物，确保野生型与突变型产物大小差异≥100bp‌。
• ‌反应体系‌：10μL体系（含1μL模板DNA、引物、Taq酶），Touchdown程序提高特异性。
• ‌电泳分析‌：1-2%琼脂糖凝胶电泳，对比Marker判断基因型‌6。

4. ‌注意事项‌

• ‌对照设置‌：需同步处理野生型C57小鼠样本作为阴性对照，并加入空白对照（ddH₂O）‌。
• ‌灵敏度优化‌：单个囊胚DNA量极少，建议采用巢式PCR或预扩增提高检测灵敏度。