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实验问答

26,167,549 科研人在看

问两个蛋白有互作，加到缓冲液里共同孵育，缓冲液：蛋白1：蛋白2的体积配比应该是多少

百泰派克-李工

两个蛋白质进行相互作用实验时，缓冲液与蛋白质的体积比通常取决于需考虑多个因素，包括蛋白质的浓度、活性、相互作用的类型和强度，以及实验的特定目的。没有统一的“一刀切”配比。一、配比的选择：一个常见的起点是使用等摩尔的蛋白质，即蛋白1和蛋白2的摩尔浓度相同。例如，如果两个蛋白质的分子量相似，可以尝试按体积1:1混合。然而，根据两蛋白之间的互作类型和亲和力，可能需要调整这个比例。对于低亲和力的互作，可能

1 回答280 围观

问SDS-PAGE电泳marker背景相比于样品背景更加透明，脱色脱的更干净是什么原因

百泰派克-李工

SDS-PAGE电泳中marker（标记物）背景比样品背景更透明、脱色更干净主要是由于：1.蛋白浓度差异：Marker通常是纯化的蛋白，浓度较低，而样品中的蛋白可能浓度较高。高浓度蛋白在电泳后更难脱色。2.样品的其他成分：样品中除了蛋白质外，还可能含有影响染色和脱色的其他成分，如脂质、核酸或其他小分子，这些成分可能会影响染料的吸附和释放。3.蛋白质组成差异：样品中可能含有一些与染料有较强亲和力的蛋

1 回答723 围观

问蛋白质组学里面检索数据库要怎么选择？

百泰派克-李工

蛋白质组学研究中选择合适的蛋白质数据库是关键一步，因为它直接影响到质谱数据的解析和鉴定的准确性。一些常用的蛋白质数据库及其适用情形如下：1.UniProt (Universal Protein Resource)：这是最全面的蛋白质数据库之一，包含了大量物种的蛋白质序列信息。适用于多种物种的蛋白质组研究，特别是那些已经有较完善基因组注释的物种。2.NCBI RefSeq (Reference Se

1 回答636 围观

问wb蛋白鉴别实验凝胶脱色后 marker泳道相比于样品泳道背景更透明

百泰派克-李工

在Western Blot (WB) 蛋白鉴别实验中，凝胶脱色后发现marker泳道相比于样品泳道背景更透明，是实验过程中常见的现象，通常是由几个因素造成的：1.蛋白质浓度差异：样品中的蛋白质浓度可能远高于marker。在染色和脱色过程中，高浓度的蛋白质可能导致更强的染色，相应地，在脱色时也更难以完全去除染料。2.蛋白质组成差异：样品中的蛋白质可能与染料有更强的亲和力，或者样品中含有某些染料难以去

1 回答296 围观

问蛋白纯化时，老是挂不上柱子是为什么呢？

百泰派克-李工

在蛋白纯化过程中，如果蛋白质不能有效地吸附到柱子上，可能有几个原因：1.缓冲液pH不适宜：蛋白质的结合通常取决于其等电点和缓冲液的pH。如果pH不适宜，蛋白质可能无法正确结合。2.盐浓度过高或过低：盐浓度会影响蛋白质的溶解度和结合能力。如果盐浓度不适宜，可能会阻碍蛋白质的吸附。3.柱子的问题：柱子可能被堵塞或者失活。需要检查柱子是否正确存储和维护。4.蛋白质的特性：有些蛋白质可能因为其特殊的物理或

1 回答1343 围观

问WB肠组织蛋白提取上清黄色正常吗？

百泰派克-李工

在Western Blot（WB）实验中，肠组织蛋白提取的上清呈现黄色是正常的情况。这种黄色通常来源于组织中的胆汁色素，这些色素可以使蛋白提取液呈现黄色。然而，需要注意的是，样品的颜色并不直接影响Western Blot实验的结果，更重要的是确保蛋白提取和浓度测定的正确性。如果有其他异常现象或者实验结果不理想，可以考虑检查提取步骤和使用的试剂。

1 回答569 围观

问兔多抗用溴化氢琼脂糖凝胶纯化没有成功是什么原因？一般怎么验证抗原偶联上了？

百泰派克-李工

使用溴化氢琼脂糖凝胶纯化兔多抗失败可能有多方面的原因，比如：1.凝胶本身的问题：凝胶的特性可能不适合所用的抗原或抗体，不同的凝胶有不同的孔隙大小和亲和力特性，确保使用的琼脂糖凝胶适合于你的实验。2.偶联效率低合：如果抗原和载体（如琼脂糖珠）的偶联效率不高，可能导致目标抗体的亲和力不足。3.洗脱条件：洗脱条件（如pH、盐浓度）可能不适宜，导致抗体不能有效从凝胶中洗脱出来。调整洗脱液的pH值或盐浓度可

1 回答265 围观

问请问，WB电泳的时候，蛋白的上样量为什么是20ug-30ug，蛋白量过多过少会怎么样？蛋白上样量是与WB的测定目的有关吗？

百泰派克-李工

Western Blot（WB）实验中，蛋白的上样量通常建议在20μg-30μg之间，因为这个量级通常能保证足够的蛋白量以获得清晰的条带，同时又不至于过多导致信号饱和或条带模糊。如果蛋白量过多，可能导致信号过强、条带模糊，甚至可能出现条带堆积的现象；如果蛋白量过少，则可能导致信号弱，难以检测到目标蛋白。此外，蛋白上样量也与WB的具体测定目的有关。例如，当研究低丰度蛋白或进行定量分析时，可能需要调整

9 回答13358 围观

问转膜过程前，为什么需要用转膜缓冲液浸泡膜啊？

百泰派克-李工

在转膜过程中使用转膜缓冲液浸泡膜是出于几个关键原因：1.膜的活化：某些膜材料，如硝酸纤维素或聚偏氟乙烯（PVDF），需要通过缓冲液活化以提高其亲和力，确保蛋白质有效地从凝胶转移到膜上。2.防止干燥：保持膜的湿润状态防止在转膜过程中干燥，干燥的膜可能导致蛋白质转移不均匀或效率降低。3.维持pH和离子强度：缓冲液有助于维持适宜的pH和离子强度，这对于蛋白质的稳定性和转移效率非常重要。4.减少背景噪音：

5 回答655 围观

问有没有大佬知道WB出现这种过曝光的条带是为什么啊？有什么解决办法吗？

静心观照

原因：中心部位高浓度HRP把底物消耗过快，中间部位底物消耗结束之后就不发光了解决办法：降低蛋白量，降低一抗和二抗的浓度。补救措施：可以调整一下曝光时间，在底物消耗完之前完成显影。最好还是从降低蛋白量，降低一抗二抗浓度入手。

5 回答5007 围观

问WB电泳样品孔中加样量一般是多少，这是根据什么来设定的，过多或过少又会导致什么后果诶

百泰派克-李工

免疫印迹(Western Blot, WB)电泳中样品孔加样量的确定取决于几个因素，主要包括凝胶的尺寸、孔的容积、样品的浓度和所需检测的蛋白质的丰度。通常，加样量范围在10到30微升之间。如果加样量过多，可能会导致以下后果：1.样品溢出：样品可能会从一个孔溢出到相邻的孔，导致结果混淆。2.条带模糊：蛋白过载可能导致条带模糊不清，难以区分。3.影响分离效果：过多的样品可能会干扰蛋白的有效分离。如果加

4 回答6527 围观

问各位老师，我目前已经用His标签纯化了目的蛋白A。做Co:Ip时，可不可以用myc标签纯化另一个蛋白，然后做co,ip实验？

百泰派克-李工

可以的。使用His标签纯化目的蛋白A之后，您完全可以使用Myc标签来纯化另一个蛋白，然后进行共免疫沉淀（Co-IP）实验。这种方法允许您特异性地识别和纯化两种不同的蛋白，从而使得Co-IP实验更加精确和可靠。在实验中，您可以用抗Myc抗体捕获Myc标签蛋白，然后检测是否有His标签的蛋白A与之相互作用。这种双重标签的方法增加了实验的特异性，有助于更准确地确定蛋白之间的相互作用。

4 回答643 围观

问蛋白组学检测到的差异蛋白为什么western blot检测不到？

百泰派克-李工

蛋白组学通过质谱等技术检测到的差异蛋白在Western Blot中检测不到可能有几个原因：1.检测灵敏度不同：质谱等蛋白组学方法通常比Western Blot更敏感，能检测到低丰度的蛋白。2.靶蛋白特异性：Western Blot依赖特异性抗体识别目标蛋白，如果抗体对该蛋白的识别性不好或者抗体质量问题，可能导致检测不到。3.蛋白修饰和变体：某些蛋白在体内可能经过翻译后修饰或存在不同的剪接变体，这些

6 回答896 围观

问WB的泳道背景比较黑，接近灰色是为什么啊？

百泰派克-李工

Western blot泳道背景变黑或接近灰色通常是由于以下几个原因造成的：1.过度曝光：如果曝光时间太长，胶片或成像系统可能会捕捉到过多的信号，导致背景变暗。2.膜处理不当：在转移或阻断步骤中，如果膜处理不当，比如阻断不充分，可能会导致非特异性结合，使背景变暗。3.抗体浓度过高：主抗体或次抗体浓度过高也会增加背景信号。4.洗涤不充分：如果洗涤步骤不充分，残留的抗体或检测试剂可能会增加背景。解决这

9 回答2887 围观

问小分子蛋白（10KD）WB实验电泳液中不加SDS，但是wb不就是依靠SDS聚丙烯凝胶电泳的吗？如果不加SDS，是用tris填平吗

百泰派克-李工

小分子蛋白（10KD）在进行Western Blot（WB）实验时，通常确实使用SDS聚丙烯酰胺凝胶电泳（SDS-PAGE）。SDS是一种表面活性剂，它的作用是使蛋白质变性并赋予蛋白质负电荷，使蛋白质按照大小进行分离。如果你在电泳过程中不加SDS，蛋白质将不会完全变性，这意味着蛋白质的电泳迁移不仅受到它们大小的影响，还受到它们的形状和电荷的影响。这种情况下通常使用的是非变性电泳，或称为天然电泳。在

5 回答1455 围观

问wb目的条带连成一条，内参正常，可能原因

百泰派克-李工

如果您的 WB（Western Blot）目的条带连成一条，但内参正常，可能的原因包括：1.过度加载样本：如果您加载的目标蛋白质样本过多，它们的条带可能会连成一条，因此请确保加载适量的样本。2.抗体亲和力过强或浓度过高：使用的一抗或二抗过于亲和或浓度设置得过高，导致过度染色。3.过度迁移时间：迁移时间过长可能会导致条带的扩散和连成一条，因此请确保迁移时间适当。4.蛋白质浓度不均匀：如果样本中的目标

4 回答1653 围观

问细胞单克隆，有限稀释法铺完96孔板后，3-4天细胞就全部死亡，什么原因？

土井挞克树

检查一下培养时间，和培养环境。死亡大概率是环境问题。

6 回答1883 围观

问爱思唯尔投稿Decision in process状态

514舍长

请问您最后怎么样？我也是这个，感觉大概率悲剧

4 回答3535 围观

问ros流式检测

yibufinn123

请问有双峰的Ros流式图，结果可用吗？放论文里可以嘛？这个现象挺常见的

3 回答1693 围观

问严格厌氧菌的生长曲线测定

Eason老歌迷

三个标样平行试验的相对偏差应小于0.25%如果平行样相差大，那么你就得重新再做平行实验。是不是你没有摇匀呢?或者就是你吸样的时候没有操作好。

4 回答2196 围观

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