实验问答

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科研学霸天团，48小时有问必答

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问网状meta漏斗图这样怎么办？用的stata，求教怎么解决

百泰派克-李工

同问，有哪位大佬解决了这个问题吗？

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问昨天新倒的平板，没有用，密封放四度了，今天长出了雪花状的东东，这是个什么情况，有大佬知道吗？

凌晨三点Dxy

污染的原因有很多，是所有平板都这样，还是就一个？

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问水和土壤中有机磷农药残留量测定？

凌晨三点Dxy

问题写得详细点吧，就这样是想问什么问题呢？

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问提取黄酮含量怎么测定?

凌晨三点Dxy

植物提取黄酮含量的测定方法有多种，其中常用的有酸水解法、紫外分光光度法和高效液相色谱法。酸水解法是将黄酮骨架中的糖部分裂解，然后用紫外光谱法或高效液相色谱法等方法测定莽草中黄酮类的总含量。此方法会破坏一部分黄酮类化合物的结构，并需要大量的试剂和时间。紫外分光光度法是以总黄酮类物质的测定为例，吸取一定量的样品溶液，置于比色管中，用乙醇溶液补充至一定体积，加入一定量的亚硝酸钠溶液，放置一段时间后，加入

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问4915bp片段与pcDNA3.1载体一直连接不成功

丰丰2018

这个片段属于长片段，用酶切连接的话，效果一般，可以考虑用同源重组的方式。有联系方式吗

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问家人们，谁知道收集的大肠杆菌后发青色是怎么回事？

百泰派克-李工

同问，我也遇到了这种情况，求大佬解答

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问激光扫描共聚焦显微镜的操作方法

凌晨三点Dxy

激光扫描共聚焦显微镜的操作方法如下：打开电脑，运行ZEN软件。点击“start system”，等待硬件自检结束。点击“acquisition”，选择“standby”，等待激光器预热。等“status”显示ready后开启激光器。双手握紧物镜上部，轻轻缓慢抬起镜头。把物镜调为63X Oil（细胞），40X Oil（组织）。把油滴一滴到目镜上。看两个样品加一滴油，如果脏了要用清洗液清洗，并擦干净。

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问p62蛋白两条带可以用嘛？是p62蛋白被修饰了吗？

百泰派克-李工

当Western Blot分析中观察到p62蛋白出现两条带时，这可能表示p62蛋白发生了一种或多种形式的翻译后修饰。第一种情况：P2蛋白发生了翻译后修饰p62蛋白可能经历了磷酸化、泛素化、糖基化等翻译后修饰，这些修饰可以改变蛋白质的迁移率，导致电泳时出现多个条带。例如，磷酸化会使蛋白质带负电，从而改变其在凝胶中的迁移。第二种情况：P2蛋白降解了如果p62蛋白部分降解，可能会产生较小的片段，这些片段

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问转膜以后没封闭，pvdf膜存4℃冰箱前没晾干有啥后果？

百泰派克-李工

将PVDF膜（聚偏氟乙烯）转膜后直接放入4℃的冰箱而不进行晾干，可能会带来几个潜在的问题：1.水分残留：如果膜上有水分残留，低温条件可能导致水分凝结，这可能会影响膜的物理结构和性能。2.膜结构改变：PVDF膜在潮湿条件下可能发生结构上的改变，这可能会影响其后续的应用效果，如过滤或分离性能。3.微生物生长：虽然低温条件能抑制大多数微生物的生长，但长时间存放可能会促进耐寒微生物的生长，尤其是如果膜上有

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问做WB时，小kd的条带跑出来是倒u型弯曲，稍大些kd的是正常的，为什么呢，是胶没配好，还是电泳夹子是漏的？

百泰派克-李工

在蛋白质凝胶电泳（Western Blot, WB）中，如果小分子量（小kd）的蛋白条带出现倒U型弯曲，而较大分子量（大kd）的蛋白则正常，这可能是由几个因素引起的：1.凝胶问题：如果凝胶制备不均匀或者在聚合过程中发生了问题，可能会导致蛋白质在电泳过程中不均匀迁移。比如，凝胶中的交联密度不均匀可能会导致小分子量蛋白质在电泳过程中发生变形。2.样品过载：如果样品量太多，尤其是小分子量的蛋白质，可能会

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问请问免疫共沉淀Co-IP后能够做定量比较吗？

百泰派克-李工

免疫共沉淀（Co-IP）实验后通常不适合直接用于定量比较，因为此技术主要用于检测蛋白质间的相互作用，而不是蛋白质的表达量。Co-IP更多地被视为一种定性方法，用于确认蛋白质之间是否存在相互作用。如果需要进行定量比较，可以考虑使用免疫印迹（Western Blot）等其他方法来补充Co-IP实验的结果。免疫印迹能提供更精确的蛋白质定量信息。然而，即使使用这些方法，也需要注意样本处理、蛋白质载量和检测

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问求问WB 的目的蛋白分子量160kDa，转膜条件怎么设定

百泰派克-李工

在进行Western Blot（WB）分析时，如果目标蛋白的分子量为160 kDa，转膜条件应该注意以下几点：1.膜材料：对于大分子蛋白（如160 kDa），通常推荐使用PVDF（聚偏氟乙烯）膜，因为它具有更高的蛋白结合能力。2.转膜缓冲液：使用含有适量甲醇的转膜缓冲液。甲醇有助于蛋白质更好地结合到PVDF膜上，但过多的甲醇可能会导致蛋白质过度聚集，影响转移效果。通常，缓冲液中甲醇的比例为10-2

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问WB结果分子量增加了20kDa,怎么去磷酸化、去糖基化来验证翻译后的修饰

百泰派克-李工

Western Blot（WB）实验中，若观察到某蛋白的分子量相比预期增加了20kDa，这可能表明该蛋白经历了翻译后修饰。为了验证这一点，你可以采取以下步骤：一、去磷酸化验证1.样品准备：首先，确保你有足够的蛋白样品。2.选择适当的磷酸酶：通常使用碱性磷酸酶（如Lambdaprotein phosphatase）或其它专门的去磷酸化酶。3.进行磷酸酶处理：根据酶的说明书进行操作，通常是在特定的缓冲

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问在实验中，最多可以同时检测几种不同蛋白在细胞内的成像？分别选择哪几种荧光蛋白作为报告蛋白可以实现？说明理由。

migger

只要蛋白荧光在荧光发射图谱上的峰不重叠，颜色也不同就可以。跟显微镜没多大关系，主要是蛋白。

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问WB实验我需要有什么准备?

百泰派克-李工

在进行Western Blot（WB）实验之前，有几个关键准备工作需要完成：一、实验设计:二、样品准备:三、电泳准备:四、转膜准备:五、膜阻断和抗体孵育:六、检测:七、其他材料和设备:八、实验记录和数据分析:在进行WB实验之前，建议仔细阅读相关的操作手册，如果有必要，可以先进行小规模的预实验来优化条件。对于实验中可能出现的问题，准备一些排错策略也是非常有帮助的。

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问请问怎么用高效液相识别水体中蓝绿藻的演替呀

百泰派克-李工

蓝绿藻演替主要是指不同种类蓝绿藻在水体中的优势地位随环境变化而发生的变化。使用HPLC进行此类研究的一般步骤如下：1.样品采集：2.样品处理：3.色谱分析：4.检测：5.数据分析：二、注意事项1.色素稳定性：2.色谱条件优化：3.标准品对照：4.重复性和准确性：

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问Wb小白求助各位大佬肠occludin

dxy_18063lu9

请问你跑出来了吗？？用什么参数？条带怎么样？

1 回答725 围观

问THP-1细胞经过PMA诱导成M0后IL-1b分泌量很高

loveliufudan

对于你所观察到的IL-1β高表达的情况，有几个可能的解释： 1. PMA诱导的剂量或时间可能较高或较长，过度刺激了THP-1细胞，导致它们产生炎症反应。你可以尝试减少PMA的浓度或缩短处理时间，看是否能降低IL-1β的水平。 2. PMA自身具有刺激活性，可能会诱导细胞产生炎症反应。一些研究已经显示，PMA可以刺激细胞产生炎症细胞因子。 3. 如果你使用的是酶联免疫吸附试验（ELISA）或者其他类

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问人外周血流式，结果treg的细胞内foxp3上机测不出来，是哪里出了问题?

Eason老歌迷

破核的时间我觉得是最重要的原因，破核时间不充分会造成后续步骤都染不上。其次是Foxp3染色的浓度与染色时间。

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问pcr时模版DNA浓度一般是多少最合适呢？

Tl32

pcr技术原理上面说过，30到100ng都行

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