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问
免疫荧光整个细胞都有荧光,无法辨别目的蛋白的表达,抗体浓度也是按师兄师姐说的,怎么解决?
sswei
原因有二:一是二抗浓度过高,适当降低二抗浓度即可。二是二抗发生沉淀,可以使用过滤戒者离心荧光标记二抗。
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问
进行免疫荧光染色实验时,动物组织没有固定直接放OCT里了,冰冻切片后需要再固定吗?
sswei
组织不固定直接OCT里,冰冻切片需要再固定。
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问
免疫层析的那些示意图是用什么画的呀,我现在想画个免疫层析的试纸条,找不到合适的软件
土井挞克树
可以用image软件进行绘制示意图。
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问
想请教一下,对免疫荧光的数据处理是只能处理单通道的荧光强度吗?Merge 之后的图像只是用于直接观察吗?[皱眉R][皱眉R]
huarenqiang5
是的,免疫荧光数据处理必须将2个通道的荧光分割开,获得2张图像。从而处理单通道的荧光强度。如果是多色荧光标记就是多了通道而已,分割方法也是一样的。
3 回答
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问
请问细胞免疫荧光可以用冻存再恢复的细胞嘛,以及细胞固定后可以冻存嘛?
huarenqiang5
免疫荧光可以用冻存再恢复的细胞。
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问
投稿要求整张膜,如果二抗种属不一样,可以一起混合孵育吗?
huarenqiang5
二抗种属不一样不建议一起混合孵育。
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问
cleaved caspase3蛋白做免疫组化的时候,用什么抗原修复方式最好,破膜比例多少合适?
土井挞克树
一般建议用微波加热修复法推荐的修复液:常用柠檬酸盐缓冲液(pH=6.0)。
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问
进行倾向得分匹配纳入的变量数
loveliufudan
PS评分的构建可以采用多种方法,其中包括logistic回归等。在构建PS评分时,确保有足够的EPV是很重要的,因为EPV越高,对结果的置信度就越高。通常,建议至少每个分组(例如治疗组和对照组)需要有10个事件(例如死亡或复发)才能确保具有足够的EPV。因此,如果病例组和对照组分别有45和93个个体,那么病例组的EPV仅为4.5,而对照组的EPV为9.3。在这种情况下,最好不要使用所有的基线变量来
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558 围观
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问
co-ip一般都选用哪种裂解液?课题组有RIPA(强),还有自己配的强、中、弱的裂解液,应该选哪种比较合适?
土井挞克树
一般首次使用应该选择中度的裂解液,避免过度裂解和裂解不充分
6 回答
5683 围观
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问
co-ip时出现的IgG重链条带怎么解决
土井挞克树
换另外一种二抗的IgG,是非特异性结合
4 回答
2202 围观
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问
southern blot搭桥容易倒,用什么装置比较好?
土井挞克树
可以用木架或者木板代替三折纸,会稳固很多
2 回答
560 围观
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问
southern blot 检测HBV的DNA变化,RcDNA和nsDNA的条带怎么分析?是看rc还是ns?
土井挞克树
如果看的是dna变化的话,一般是看rc。
2 回答
724 围观
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问
TH17细胞体外诱导分化比例过低
土井挞克树
还是需要把电压调回正常的水平,然后可以加入促诱剂
3 回答
3085 围观
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问
制备western blot分离胶后,使用无水乙醇还是纯水进行液封?两者有何不同吗?
土井挞克树
建议使用无水乙醇液封,无水乙醇对分离胶影响小
4 回答
2891 围观
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问
免疫组化总是会脱片,是什么原因啊?
土井挞克树
脱水时间是否太长,减少脱水的时间,考虑存在过度脱水。
4 回答
1690 围观
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问
免疫组化结果图很黄,几乎看不到蓝色
土井挞克树
先把ph检查一下,ph不合适就会染不上
3 回答
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问
做免疫荧光经验求分享?
土井挞克树
如果核定位不好,建议封闭和打孔合为一步,即在封闭液中添加0.5% TRITON-100,37度封闭2小时,加一抗后最好4度孵育过夜(16小时)。
4 回答
879 围观
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问
我对鱼的肠道染色,遇到苏木精的蓝色可以染上,0.5%伊红的红色完全染不上去,可能是哪步出了问题呢?
loveliufudan
对于鱼的肠道染色遇到苏木精的蓝色,但是无法染上0.5%伊红的红色,可能有以下几个原因:染色时间不够:染色时间不够可能会导致染色不均匀或者染色效果不佳,因此可以尝试延长染色时间。染色温度过低:温度过低可能会影响染色效果,因此可以尝试将温度调高一些。pH 值不合适:染色 pH 值不合适也会影响染色效果,因此可以尝试调整 pH 值。组织固定过度:固定过度可能会导致细胞膜破裂,染色剂不能进入细胞内部,从而
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问
酶联免疫吸附法可以提纯(99%)污泥中除磷相关酶ppk和ppx吗
土井挞克树
酶联免疫吸附法可以提纯(99%)污泥中除磷相关酶ppk和ppx,但是可能需要多次吸附和提纯
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问
免疫电泳实验中,电泳条件已经优化,但仍然无法分辨出目标蛋白。我该如何提高分辨率和灵敏度?
土井挞克树
可以在电泳之前应用免疫沉淀法将抗原进行纯化
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