实验问答

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科研学霸天团，48小时有问必答

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问基因定位

loveliufudan

病原HK基因与宿主线粒体关联的实验方法通常是通过共培养病原和宿主细胞，然后使用PCR、Western blot、免疫荧光显微镜等技术来检测宿主细胞中是否存在病原HK基因的遗传物质或蛋白质，并进一步确认其与宿主线粒体的关联。以下是可能的实验步骤：1.选择适合的细胞系：选择一种易于培养的宿主细胞系（如人类细胞系），以及包含HK基因的病原细胞系。2.共培养病原和宿主细胞：将病原和宿主细胞一起培养，使它们

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问求助怎样确认小鼠肠系膜上动脉阻断成功

土井挞克树

戊巴比妥钠或水合氯醛腹腔注射对肠道影响很小，几乎不影响造模

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问请教小鼠脾T细胞培养和测凋亡问题

loveliufudan

1.在体外培养T细胞时，增殖通常伴随着一定数量的细胞死亡。细胞死亡可以是由于培养条件不佳、培养基中某些成分的缺失、过多的细胞密度等多种因素引起的。在增殖时，细胞会逐渐增多，并且可能会部分集中在周边。细胞数量的增加和聚集现象可以通过显微镜观察到。通常，为了避免过度增殖和细胞死亡，建议根据实验需要调整细胞密度和培养条件，比如更换培养基、降低细胞密度等。2.从您提供的图片来看，凋亡图看起来可能存在一些问

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问LD和MS分选柱怎么重复利用呢

huarenqiang5

每次分选完用buffer反复冲洗柱子几遍后用无水乙醇冲洗几遍，再放入有无水乙醇容器里完全浸泡(一定要无水，不然就会生锈)，等做完实验再拿出来把柱中的无水乙醇打出，放置到一个小铁饭盒里拿去高压灭菌，在放到干燥箱里干燥就可以了，下次用的时候再拿到超净台里打开铁饭盒，用无菌镊子取出继续利用。

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问T细胞增殖是否成团

huarenqiang5

一般正常情况大概20%左右细胞成团，一直会持续到14-16天左右才散开。一定程度影响细胞增殖倍数。

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问thp-1诱导后的巨噬细胞有什么作用？ M0,M1,M2有什么区别？求各位大佬解答

sswei

作用：①作为抗原提呈细胞；②杀伤肿瘤效应细胞；③巨噬细胞杀伤肿瘤细胞的机制；④活化的巨噬细胞与肿瘤细胞结合后，通过释放溶解细胞酶直接杀伤肿瘤细胞；⑤处理和呈递肿瘤抗原，激活T细胞以产生特异性抗肿[医学教育网原创]瘤细胞免疫应答；⑥巨噬细胞表面上有FC受体，可通过特异性抗体介导ADCC效应杀伤肿瘤细胞；⑦活化的巨噬细胞可分泌肿瘤坏死因子（TNF）等细胞毒性因子和产生超氧化代谢产物间接杀伤肿瘤细胞。巨

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问基质胶3D培养干细胞时，如何提取干细胞外泌体

huarenqiang5

操作步骤：1)采用含血清培养基培养干细胞，培养至一定时间；2)然后提取干细胞，将干细胞放置在不含血清的培养基中，培养至一定时间；3)将步骤2)中的不含血清培养基中的干细胞进行分离，对干细胞进行培养，将细胞培养后的培养基，离心去除杂质；4)将经过步骤3)中提取的外泌体提取液和含血清培养基液混合后进行培育，培育后得第一孵化液，对第一孵化液进行离心浓缩，得到含外泌体的浓缩液；5)通过设置将步骤4)中含外

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问免疫实验中的控制实验是什么，它们为什么很重要？例如，如何利用阴性和阳性对照来确定实验结果的可靠性？

土井挞克树

阳性对照实验和阴性对照试验是生物学实验中常用的两种对照方法。其中阳性对照实验是对对照组施以能发生阳性反应的处理，其目的是显示阳性反应结果;而阴性对照实验是对对照组施以发生阴性反应的处理，目的是排除假阳性反应的干扰。阴性对照实验与空白对照试验并不完全相同，阳性对照实验和阴性对照试验是针对“预期结果”而言，其预期结果分别为阳性反应与阴性反应，其中阴性对照实验可采用安慰剂处理，也可采用空白对照处理。而空

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问Elisa洗板子的时候如果没有PBST可以用PBS代替么，吐温的作用是什么

土井挞克树

可以用pbs多冲洗几次，吐温主要是表面活性剂

4 回答4162 围观

问请问师兄师姐们，Trizol 法提取 RNA，加入氯仿后白膜糊在ep管上怎么处理。

土井挞克树

静止后再提取，考虑还是有析出。少量析出不影响

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问PCR实验研究突变型p53的引物有什么

土井挞克树

去ncbi网站上搜索突变型p53，根据需要可以选择引物。

3 回答352 围观

问这个是什么原因啊？是转膜温度太高了吗？但是并不是特别热啊只是稍微热一点点🤏

秋秋欣欣

也可能是蛋白的问题，有点弥散。

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问想请教一下各位前辈，做癌细胞靶向耐药相关实验，为什么逆转剂用的浓度是IC10呢，可以用IC50吗

土井挞克树

不建议，因为后续计算逆转倍数时，逆转倍数是ic50/ic50，分子为不加逆转剂的浓度。所以在逆转剂的浓度一般用ic10

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问大提质粒时，洗脱液qf可否用dd水代替

dunima

后续直接测序的话，可以代替，但要保证pH中性

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问万能的网友们！为啥跑WB的时候，样品会漏到玻璃板之间的空隙内啊😭😭😭😭

秋秋欣欣

这很明显就是胶的问题了，重新配胶看看

5 回答734 围观

问冰冻切片组织脱水方式及时间如何确定

huarenqiang5

脱水：依以下酒精梯度进行脱水，30%乙醇→50%乙醇→70%乙醇（关键步骤：可当日2H也可过夜）→95%乙醇1→95%乙醇2→无水乙醇。根据不同组织大小和类型调整脱水时间，对于小鼠肝组织95%乙醇控制在30min-1H，100%乙醇5min-30min。

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问如何查找某个基因的基因沉默序列腺病毒？

huarenqiang5

基因沉默分为转录水平的沉默（TGS）和转录后水平的沉默（PTGS）。TGS是指转基因在细胞核内RNA合成受到了阻止而导致基因沉默;对于部分植物来说,转基因引发的基因沉默可能是因为基因特异的甲基化而导致;PTGS则是指转基因能够在细胞核里被稳定地转录,但在细胞质里却无相应的mRNA存在这一现象。RNAi、共抑制、 quelling均属于PTGS。病毒基因、人工转

3 回答462 围观

问DCA曲线问题

sswei

决策曲线分析是一种评估和比较合并临床结果的预测模型的方法，只需要对模型进行测试的数据集，并将其应用于具有连续或二分类结果的模型。因此，从该图形来看，难以做出合理的结论。

3 回答413 围观

问求助：细胞冻存 -80转液氮

xuejian_hi

包装表明不可以就不行吧，会不会影响冻存细胞活性

7 回答605 围观

问293T细胞之间出现异常的白色小空泡

惊鸿曾照影

有可能是细胞碎片，不建议使用。

7 回答970 围观

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