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        做wb的时候,全膜可以一起孵育抗体吗,怎么稀释抗体?

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        好好先森MR

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        4 个回答

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        土井挞克树

        有帮助

        可以一起孵育抗体,在不同的区域,不会互相影响

        user-title

        huarenqiang5

        有帮助

        做wb时全膜可以一起孵育抗体。用 5% 封闭溶液稀释一抗(稀释比参考说明书,需要摸索),在中4 ℃ 过夜孵育膜,或在室温下孵育 2 小时(不推荐室温,除非抗体质量很好以及目标蛋白很好孵育)。用封闭液( 5% 牛奶或BSA)稀释二抗(一般1:5000-1:10000),室温孵育膜 1 小时。

        user-title

        loveliufudan

        有帮助

        如果您指的是 Western Blotting(WB)的全膜(whole membrane)孵育抗体,那么一般来说可以一起孵育抗体。

        对于全膜孵育抗体的步骤,通常需要将膜块先进行预处理,例如在Tris-buffered saline with Tween 20 (TBST) 中进行洗涤,然后进行阻断,再将抗体溶液加入孵育。在孵育抗体时,需要进行适当的抗体稀释,以避免过度反应。

        抗体稀释的具体步骤会因为实验目的、抗体种类和厂商等不同而有所不同。一般来说,可以先根据抗体厂商提供的建议进行初步的稀释,然后根据实验结果进行调整。通常,建议从较高的抗体浓度开始稀释,然后逐渐降低稀释倍数,直到得到合适的信号强度。

        需要注意的是,抗体的稀释倍数应该根据实验条件和所使用的抗体而定,过度稀释会导致检测的信号变弱,而过度浓缩则可能导致非特异性结合和背景噪音的增加。因此,需要进行适当的优化和控制。

        user-title

        秋秋欣欣

        有帮助

        可以啊,按照稀释比例全加进去就行了

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