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        THP-1诱导失败无数次,跪求高人指点?

        相关实验:肿瘤细胞诱导血管生成模型实验

        user-title

        一条小鱼_

        诱导成功的大神PMA终浓度是多少啊?诱导多长时间呢?需要relax么?后续LPS诱导浓度一直有争议,大家都用的什么浓度呢,IFN-γ10ng、20ng结果都不太理想怎么办呢

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        4 个回答

        user-title

        土井挞克树

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        pma的终浓度一般在100ng/l。

        user-title

        huarenqiang5

        有帮助

        PMA终浓度为100ng/mL,将细胞种入六孔板,每孔加入细胞2mL。48小时后显微镜下观察巨噬细胞构建成功。

        user-title

        sswei

        有帮助

        PMA诱导THP-1步骤:

        将处于对数生长期的THP-1细胞离心,用RPMI-1640培养基重悬;

        加入PMA,显微镜下细胞计数,调整THP-1细胞密度为undefined10^5/mL;

        使PMA终浓度为100ng/mL,将细胞种入六孔板,每孔加入细胞2mL;

        48h后,显微镜下观察巨噬细胞构建成功。

        单核细胞THP-1用PMA诱导后,由悬浮式生长变成贴壁生长,由圆形变成不规则形态,体积进一步增大,细胞浆疏松,细胞核增大明显,可见大量明显细胞器,胞膜周围可见少量突起。

        user-title

        loveliufudan

        有帮助

        PMA的最终浓度和处理时间:不同的实验室和实验条件下,PMA的最终浓度和处理时间可能会有所不同。一些文献建议使用25-200ng/mL的PMA处理THP-1细胞,处理时间通常在24-48小时。然而,这些条件也取决于您的实验目的和您的THP-1细胞的特性。您可以参考一些发表在专业期刊上的文章,找到与您实验相关的条件。

        是否需要relax:在PMA处理之前,一些实验室建议在无血清培养基中进行静置恢复(resting)期,通常在24小时左右。这样做是为了保证THP-1细胞在处理PMA之前保持健康和稳定,从而提高PMA诱导的效率。但是,是否需要这个步骤取决于您的实验要求和THP-1细胞的状态,您可以在自己的实验中测试一下。

        LPS诱导的浓度:LPS(脂多糖)的浓度也是一个非常重要的参数。一些研究表明,LPS的最佳浓度可以在1-10 ng/mL范围内,但实际最佳浓度也取决于您的实验目的和THP-1细胞的响应。您可以根据您的实验进行LPS浓度的优化,并且在实验中保持一定的一致性。

        IFN的浓度:如果您在使用IFN来激活THP-1细胞的过程中遇到了问题,您可以考虑优化IFN的浓度和处理时间。一些研究表明,IFN的最佳浓度通常在10-100 ng/mL之间,但这也可能因实验条件而异。您可以尝试在不同的IFN浓度下进行实验,并在实验中保持一定的一致性。


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