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实验问答

31,784,111 科研人在看

问Tau磷酸化位点很多，抗体怎么选，有什么区别？

土井挞克树

就我所做的tau抗体来说说我觉得你选择tau1,tau5,AT8三种抗体就可以了tau5可以作为tau总蛋白的定量而tau1，磷酸化位点为ser199/202.在体时主要标轴突的。

2 回答6637 围观

问FITC-CM-Dextran 怎么配

huarenqiang5

7.6gNaHCO3，1.06gNa2CO3，7.36gNaCl，加水定容至1L。将FITC溶于DMSO中，浓度为1mg/mL。每次交联使用的FITC均应新鲜配制，避光。

2 回答1089 围观

问请问一下柠檬酸钠比色法具体操作过程？

loveliufudan

柠檬酸钠比色法是一种常用于测定葡萄糖含量的方法，下面是具体操作步骤：首先将样品制备好，一般是将待测样品经过必要的处理，比如去除杂质、稀释等，使其适合测定。准备一定浓度的柠檬酸钠试剂，通常是1%柠檬酸钠溶液。将样品加入比色管中，再加入适量的柠檬酸钠试剂，混匀。将比色管放入沸水中加热10分钟，使其反应完全，然后取出冷却至室温。加入10倍体积的稀释液，混匀后使用分光光度计在波长为520nm处测定吸光度值

2 回答1888 围观

问大分子量蛋白转移效率低的解决方法

loveliufudan

以下是一些可以尝试的方法来提高大分子量蛋白的转移效率：增加电流：使用更高的电流可以加快蛋白质的转移速度。一般情况下，使用200 mA或更高的电流可以提高转移效率。延长转移时间：由于大分子量蛋白的迁移速度较慢，需要更长的转移时间来完成转移。一般来说，大分子量蛋白的转移时间需要至少1小时或更长时间。使用缓冲液含有特殊的离子浓度梯度：一些缓冲液（如Tris-Glycine）中含有特殊的离子浓度梯度，可以

3 回答340 围观

问条带立即出现肉眼可见的黄色，但是显影仪器上怎么也拍不出来条带

loveliufudan

如果在显影仪器上无法拍出实验显影内参条带，可能有以下几个原因：显影时间不够长：有时候，即使条带已经显现，但显影时间仍然不够长，导致显影强度不足，无法被显影仪器检测到。建议在检测之前将显影时间适当延长，以确保显影强度充足。显影条件不合适：不同的内参条带可能需要不同的显影条件（例如显影时间、底物浓度等），如果显影条件不合适，则可能无法被显影仪器检测到。建议根据实验要求，对显影条件进行优化和调整。显影仪

3 回答663 围观

问免疫荧光实验中，目标蛋白荧光很弱怎么办

loveliufudan

如果在免疫荧光实验中，目标蛋白的荧光很弱，可能有以下几个原因：次生抗体或探针浓度不够：次生抗体或探针是检测目标蛋白的关键试剂，如果浓度不够，可能无法充分与目标蛋白结合，导致荧光信号很弱。建议适当调整试剂的浓度，以确保充分结合和信号强度。特异性抗体质量不佳：特异性抗体质量不佳可能导致与非目标蛋白的结合，或者结合不充分，从而导致荧光信号很弱。建议更换高质量的特异性抗体，或者优化抗体结合条件，以提高信号

3 回答2273 围观

问免疫组化实验中，出现边缘效应怎么办？

loveliufudan

这可能是由于标本处理、抗体染色、显微镜成像等因素引起的。以下是一些可能的解决方法：在标本处理过程中要尽可能避免损伤标本边缘，特别是在切片过程中。在抗体染色前，将标本边缘用胶带覆盖，以减少标本边缘的信号干扰。在显微镜成像时，尽可能调整焦距和曝光时间，确保标本中央和边缘区域的信号平衡。如果使用数字成像系统，可以对图像进行后处理，如修剪边缘区域或调整图像亮度和对比度等。对于细胞免疫组化，可以尝试调整细胞

3 回答1764 围观

问请问配制1%的STZ溶液如何计算试剂量

loveliufudan

以下是柠檬酸-柠檬酸钠缓冲液的配制方法和计算步骤：首先确定你要制备多少升缓冲液，比如说1升。根据你要制备的升数和缓冲液的配方，计算出你需要的柠檬酸一水和柠檬酸三钠二水的质量，可以通过配方中的摩尔比例计算。具体计算公式为：质量（g）= 摩尔质量（g/mol）× 摩尔数（mol）× 升数（L）例如，你要制备1升柠檬酸-柠檬酸钠缓冲液，pH为6.5，配方为A液：0.1 mol/L 柠檬酸一水，B液：0.

2 回答2837 围观

问最近遇到了小鼠免疫问题

huarenqiang5

主要考虑可能是PH问题导致。确保抗原溶液本身 pH 在 5-9 之间，从而与佐剂混合后可以被缓冲至中性。

3 回答457 围观

问有淋巴细胞做抗原实验

huarenqiang5

免疫同一只小鼠建议用同一品类的血液提取的淋巴细胞。免疫小鼠1.0×10-2.5×10 个脾细胞。

3 回答853 围观

问酶放大免疫实验技术

huarenqiang5

荧光标记技术：是把荧光基团的共价键连接到蛋白、核酸等能够识别分子物质上的一种技术。目前有新型的一种免疫荧光信号放大技术标记方法是荧光标记技术中的一种。

3 回答1119 围观

问杂交瘤细胞什么时候进行传代？

huarenqiang5

当细胞处于对数生长的中期时，可按1:3~1:10的比例传代。每3~5天传代一次。

4 回答944 围观

问transwell染色后用PBS洗三遍晾干后有结晶是啥原因？

loveliufudan

结晶的出现可能是由于使用的PBS中含有过多的离子，这些离子在干燥过程中结晶，导致结晶形成。为了避免结晶的出现，可以尝试使用去离子水代替PBS进行洗涤，并在洗涤后彻底干燥Transwell膜。另外，也可以调整PBS的pH值，以确保其最大限度地溶解其中的盐类。

3 回答1100 围观

问激光共聚焦显微镜与荧光显微镜显示的染色结果为何不同？

huarenqiang5

1、荧光显微镜：荧光显微镜是免疫荧光细胞化学的基本工具。它是由光源、滤板系统和光学系统等主要部件组成。是利用一定波长的光激发标本发射荧光，通过物镜和目镜系统放大以观察标本的荧光图像。2、激光共聚焦显微镜：激光扫描共聚焦显微技术已用于细胞形态定位、立体结构重组、动态变化过程等研究，并提供定量荧光测定、定量图像分析等实用研究手段，结合其他相关生物技术，在形态学、生理学、免疫学、遗传学等分子细胞生物学领

3 回答1465 围观

问如何通过免疫组化实验来确定某个蛋白质是一个潜在的免疫识别分子？

土井挞克树

可以使用已知抗体去验证未知的免疫识别分子，如果产生了特异性结合，那么可以确定这个蛋白是潜在的免疫识别分子

1 回答587 围观

问做间接法免疫荧光染色要怎么设置对照？

土井挞克树

可以用已知的组织做阳性对照。或者直接做空白对照简单一些

3 回答1491 围观

问乙肝表面抗原ELISA方法检测弱阳性的处理方法

土井挞克树

除了化学法，还可以做免疫荧光实验，看抗原的表达强度，来检测阳性的强弱

3 回答1239 围观

问脱氧核酶实验是什么实验？

土井挞克树

脱氧核酶实验是利用体外分子进化技术获得的一种具有催化功能的单链DNA片段，具有高效的催化活性和结构识别能力，进行未知识别的实验方法。在恶性肿瘤的研究方面有巨大前景

3 回答858 围观

问请问悬浮细胞（例如真菌的原生质体）应该怎么保持固定不被pbs冲洗掉？

huarenqiang5

采用多聚甲醛固定法进行固定：A.PBS 配制 4% 多聚甲醛。B. 用 PBS 洗涤细胞 2 次，200 g 离心 5 分钟；重悬细胞。C. 用 4% 多聚甲醛溶液悬浮细胞，细胞浓度约为 1x106/ml，室温下静置 15 分钟, 不时摇动。D. 200 g 离心 5 分钟，用 PBS 重悬细胞，重复洗涤细胞 2 次；E. 用含 0.2% TritonX-100 或 NP-40 的 PBS 溶液透

3 回答880 围观

问流式中，标记的抗体已经验证过，但却无法正确鉴定特定类型的免疫细胞。我该怎么确定鉴定的准确性？

sswei

如果是外周/脾脏/淋巴结的免疫亚群鉴定，在进行红细胞裂解或者梯度密度离心后所获得细胞都是纯度非常高的PBMC，可以在流式细胞仪上通过FSC和SSC这2个形态学通道明确的选出免疫细胞。但一些病人的样本或者是一些处理不好的样本，很难从FSC和SSC通道上获得明确的PBMC形态，此时就应该检测CD45来严谨的gate出免疫亚群了。

2 回答879 围观

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