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问
想知道免疫酶染色中的 3% 过氧化氢及 2N 盐酸是否还需要用?
loveliufudan
在免疫荧光实验中,过氧化氢和盐酸通常用于免疫酶染色的显色步骤。过氧化氢用于去除样本中的内源性过氧化氢,以避免假阳性结果。2N 盐酸则用于裂解细胞膜和细胞核,以释放酶底物和染色质,并使细胞内的目标抗原易于识别。但是,在进行免疫荧光实验时,由于您使用的是二抗 FITC 标记,而不是酶标记,因此不需要使用过氧化氢和盐酸进行显色步骤。因此,您可以不使用 3% 过氧化氢和 2N 盐酸。需要注意的是,即使您不
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问
求助 大鼠杏仁核取材方法
龙大人驾到
大鼠杏仁核取材需要先行动物体内注射麻醉剂,确保大鼠无痛苦,并进行以下步骤:1. 用生理盐水洗涤大鼠头部,以除去外表的污垢和细菌。2. 制备一支大鼠取材钳(也称为显微取材器),将其用70%乙醇消毒并放入PBS缓冲液中。3. 将大鼠固定在取材架上,使用手术刀在头部处进行切口,直至完全暴露出颅骨。4. 使用电动钻钻开颅骨,注意不要损伤杏仁核。然后,通过使用细长、平底的巴氏手术刀,切割硬脑膜,揭露出杏仁核
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问
c56小鼠做uuo死亡率高么?
sswei
即使经验丰富的老手操作,使用小鼠进行UUO法制备模型,死亡率也会很高。同时,小鼠组织太少,如果检测指标较多而动物数又不够,可能会出现组织量不足的情况。建议选大鼠。
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问
怎么检测MDSC的免疫抑制作用?采用什么体外实验?
天一湖医者
1、MDSC+T细胞共培养,CFSE标记T细胞,流式检测T细胞增殖2、MDSC+激活后的T细胞共培养,ELISA检测培养上清中T细胞活化分泌IFN-γ的量
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问
细胞里面有小的蓝色DAPI荧光,是细胞核碎了导致的吗?
huarenqiang5
主要考虑:第一,DAPI染料有没有问题;第二,切片有没有问题;第三,方法是否正确。
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问
免疫荧光整个细胞都有荧光,无法辨别目的蛋白的表达,抗体浓度也是按师兄师姐说的,怎么解决?
sswei
原因有二:一是二抗浓度过高,适当降低二抗浓度即可。二是二抗发生沉淀,可以使用过滤戒者离心荧光标记二抗。
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问
进行免疫荧光染色实验时,动物组织没有固定直接放OCT里了,冰冻切片后需要再固定吗?
sswei
组织不固定直接OCT里,冰冻切片需要再固定。
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问
老板要求描述树突的长度和数量,不知道怎么弄?谁能提供一下帮助啊
sswei
树突的总长度可以通过用其所占的体积除以树突的平均横截面积来计算获得。
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问
WB实验中总是在目标条带下面还有点细细的小条带,不知道如何去除?留着很丑。此外,目标条带,分析软件哪个更好?
sswei
可以采用以下方法去除小条带:1、更换一抗,换单克隆的。2、不换一抗,降低一抗稀释比,这样目的条带会变弱,不过杂带也会,有时候就可以去掉杂带了。3、多封闭一下。4、洗膜的时候多洗几次。
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问
使用ChIP技术验证基因的转录调控
sswei
其原因:一是引物与靶序列不完全互补、 或引物聚合形成二聚体.二是Mg2+离子浓度过高、退火温度过低,及PCR循环次数过多有关.其次是酶的质和量,往往一些来源的酶易出现非特异条带而另一来源的酶 则不出现,酶量过多有时也会出现非特异性扩增.
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问
小鼠大脑切片的免疫化学实验
sswei
包括阳性对照在内,全部呈阴性反应,原因可能是:①染色未严格按操作步骤进行;②漏加一种抗体,或抗体失效;③缓冲液内含叠氮化钠,抑制了酶的活性;④底物中所加H2O2量少或失效;⑤复染或脱水剂使用不当。
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问
western blot同一批sample出来的条带趋势完全相反,为什么会这样?
huarenqiang5
考虑是转膜时没贴紧导致电流分配不均或显色过程中显色液加得不均匀造成的。
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问
TH17细胞体外诱导分化比例过低
土井挞克树
还是需要把电压调回正常的水平,然后可以加入促诱剂
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问
做免疫组化实验组织标本固定时间多久合适?
sswei
免疫组化实验组织标本固定时间一般在24一48小时。
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问
免疫组化实验组织脱水、浸蜡不充分会导致什么结果?
sswei
如果组织脱水、浸蜡不充分,蜡块会出现组织收缩凹陷,而且在免疫组化热抗原修复操作时会容易脱片。
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问
免疫沉淀实验中,如何判断抗体的亲和性和特异性,是否有其他实验可以用于确认结果?
sswei
抗体特异性验证的几种方法:1. 多抗体验证,2.基因敲除/敲降验证,3.天然差异对照验证,4.酶法检测验证
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问
Elisa结果不是特别好,老板让做elispot.有详细的步骤么有大佬做过么,要注意什么
huarenqiang5
直接间接法刺激方法:建议用PMA和娄诺霉素刺激PBMC,使其产生IFNγ。在培养液中稀释PBMC,其中含1ng/ml PMA和500ng/ml娄诺霉素(Sigma, Saint Louis, MO)。加5X104至3x105个细胞到抗体包被的PVDF孔,孵育箱中孵育10-15小时。其它的刺激剂孵育时间可能不同,基于细胞因子生成细胞的量,按不同情况作最佳选择。操作过程1. 用50ul 70%酒精孵育
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问
求助大家:PBMC可以诱导分化pDc吗,该如何做呢,请各位大神指教
龙大人驾到
PBMC可以诱导分化成pDC。以下是一种常用的方法:1. PBMC提取:从新鲜采集的人类全血中提取PBMC,方法包括梯度离心、红细胞淋巴细胞分离液等。2. 培养PBMC:将PBMC在含有GM-CSF和IL-4的培养基中培养5天以获得生长迅速的DC。3. 刺激分化:将培养的DC在缺乏血清的培养基中刺激24小时,通常使用CpG DNA进行刺激,也可使用病毒、细菌等免疫刺激物。4. 分化pDC:将刺激过
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问
LPS诱导细胞炎症促进防御素表达
汤姆卜丽波
可以分析你的测序结果啊,看看不同浓度诱导的表达有什么差异
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问
转投状态怎么看
dxy_oysk2ye9
一样的情况,是不是要等编辑那边发邮件?
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