dxy_gazdh735
如题,老师想把成瘤后的LLC肺癌组织分离为细胞做流式,但是还不愿意花钱买肿瘤组织分离试剂盒,让我们自己配
现在看了几种方法,主要区别在实体瘤的消化上,有的只用了胰酶,有的还用了胶原酶、透明质酸酶和DNA酶
由于是做流式,不考虑继续传代培养,所以方法可以草率一点
想问一下有没有做过的前辈,可以指点一下,谢谢
土井挞克树
不考虑后续的话建议胰酶,胶原酶、透明质酸酶和DNA酶都加用,可以裂解的好一些
dxy_gazdh735
请问用胰酶的话会不会对膜上的蛋白破坏的比较厉害?因为后续还要上流式,检测膜表面受体
loveliufudan
对于从实体瘤中分离细胞的方法,常用的方法包括机械分离和酶消化。机械分离通常是通过切碎组织和筛选细胞来实现,但由于需要较大的组织量和较强的机械操作技能,不太适合小规模实验。因此,酶消化是一种更为常用的方法。
对于酶消化,常用的酶包括胰酶、胶原酶、透明质酸酶和DNA酶等。这些酶可以分解细胞外基质和细胞间的连接蛋白,使得细胞可以从组织中释放出来。具体的消化方法可以根据实验需要进行调整,以下是一个可能的步骤:
将收集到的LLC肺癌组织洗涤干净,并用刀片切成小碎片。
将碎片放入含有胰酶(0.25%)和DNA酶(100 U/mL)的消化液中,并在37℃下振荡消化1-2小时。
将消化液过筛滤除细胞外基质和组织碎片,并用PBS洗涤细胞。
通过离心将细胞沉淀下来,并用PBS洗涤1-2次。
可以进行细胞计数、染色和流式细胞分析等实验。
需要注意的是,不同类型的酶可能对细胞的存活和表型有不同的影响,因此在实验中需要进行细胞存活率和表型分析。同时,如果实验需要,可以使用其他酶或方法进行组织消化,以获得更好的细胞分离效果。
dxy_gazdh735
请问用胰酶的话会不会对膜上的蛋白破坏的比较厉害?因为后续还要上流式,检测膜表面受体。还有我看一些Protocol是37°消化30min,37°震荡消化1-2小时会不会有点长了?
huarenqiang5
将组织块用机械法或化学法使细胞分散。