大草原的小灰驴
做细胞免疫荧光,4%多聚甲醛固定,最后细胞核荧光更强是什么原因。同样条件用甲醇固定细胞核则没有,谢谢!
多聚甲醛没问题,最近买了瓶新的,同一个货号,但是最近两次都把膜蛋白染到核里了,用FITC染色细胞骨架,同样全部染到细胞核上了。
土井挞克树
首先考虑的是核蛋白破裂,破裂后就会造成核蛋白污染,产生这种结果
loveliufudan
使用4%多聚甲醛固定细胞可能会导致核荧光强度增加的原因可能是多方面的:
多聚甲醛对核的固定效果更好,固定时间更长可能会导致细胞核中的蛋白质含量增加,从而增加了细胞核的荧光强度。
多聚甲醛可能会使得一些蛋白质更容易被暴露在细胞表面,从而增加了抗体结合的机会,进一步增强了细胞核的荧光强度。
甲醇固定可能会破坏细胞膜和细胞骨架,导致染色效果不佳。而多聚甲醛相对更温和,能够更好地保持细胞形态和细胞膜完整性,从而提高染色效果。
至于最近多聚甲醛染色出现的问题,可能是多聚甲醛的质量存在问题,也可能是染色的步骤和条件存在问题。建议检查多聚甲醛是否已经过期或者质量存在问题,同时检查染色步骤和条件是否存在误操作或变化。另外,对于细胞骨架染色,可以考虑使用其他适合的荧光染色方法,例如鬼笔环技术、原位杂交等。
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