实验问答

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科研学霸天团，48小时有问必答

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问vonfrey测量求助

土井挞克树

一般纤维丝的g数选择八根分别为纤维丝克数：（g）： 0.16、0.40、0.60、1.0、1.4、2.0切断值为2.0g；

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问动物旷场实验指标问题

土井挞克树

意义是，运动总距离可以反应大鼠的运动情况。例如抑郁大鼠水运动总距离将大大减少，多躲避于旷场一角不动。

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问去泛素化酶UCHL5具有什么作用？

loveliufudan

1.调控泛素降解途径：UCHL5参与调控泛素降解途径，可以从泛素化的蛋白质上去除泛素标记，从而减少它们的降解速度。UCHL5的活性还能够促进有降解目标的泛素连接酶E3的活性。2.调节蛋白稳定性：除了参与泛素降解途径外，UCHL5还能够直接调节某些蛋白的稳定性。例如，在胚胎干细胞中，UCHL5可以去除表观修饰蛋白SUZ12的泛素标记，从而增强其稳定性，维持干细胞状态。3.参与DNA损伤修复：UCHL

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问loading buffer连到一起呈锯齿状，上样量20ul,请问为什么会出现这种情况？

loveliufudan

很可能是loading buffer 没有完全溶解或没有彻底混合。可以首先尝试充分混合和完全溶解 loading buffer。

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问双元表达载体如果转录过程基因后面没加终止子，直接是新的启动子会影响基因表达吗

loveliufudan

如果双元表达载体转录过程中基因后面没有加上终止子，会导致基因的表达被影响。如果只有一个启动子，转录过程可能会继续进行，导致RNA链的延伸超出载体的范围，从而产生杂乱的RNA序列，这些序列可能会干扰其他基因的表达或干扰正常的细胞代谢过程。此外，如果在基因后面没有加上终止子，可能会影响细胞内的mRNA稳定性和翻译后的蛋白质产量。因此，为了确保基因的正常表达，双元表达载体转录过程中一般需要加上适当的终止

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问本人要做原代脂肪细胞，但是提取之后发现养着养着培养皿就开始出现小黑点，像细沙一样，请问应该怎么解决

loveliufudan

这种情况可能是由于细菌或真菌污染所致，可以考虑采取以下措施来解决问题：丢弃受污染的培养皿：如果你发现一些小黑点，可以将受污染的培养皿丢弃，以防止进一步污染其他培养皿。更换培养基：你可以更换新的培养基，并且添加适当的抗生素或抗真菌药物，以杀死任何污染的微生物。加强无菌操作：要防止细菌或真菌污染，可以加强无菌操作，如在实验室中进行操作时穿戴实验服、戴手套，使用灭菌器灭菌培养器具等等。检查供试细胞的来源

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问人脐静脉内皮细胞（HUVEC）传代培养，胰酶消化后，在培养基中，放入培养箱前在显微镜下观察，细胞会聚团是怎么回事啊？菜鸡求助大

认真搞科研的小王

1.细胞-细胞相互作用：HUVEC有一定的自组织能力，胰酶消化后可能会导致表面受损或暴露出附着分子，促进细胞聚集和形成群体。2.细胞-基质相互作用：HUVEC也可以通过与培养基中存在的基质分子（如纤维蛋白、胶原等）相互作用，构建三维结构并形成群体。3.胰酶活性未被及时抑制：在胰酶消化过程中，如果胰酶活性未被及时抑制，则会导致胰酶继续消化HUVEC表面的附着分子，使得细胞表面失去黏附能力，从而发生细

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问请问一下表皮细胞常选用的细胞株是哪种呀？怎么搜索查找到皮肤相关细胞常用的细胞株呢？（新手小白真诚发问)谢谢谢谢！

loveliufudan

表皮细胞的常用细胞株包括HaCaT、HEK293T、A431、NHDF、NHEK等。如果你想查找皮肤相关细胞的常用细胞株，可以通过以下几种方式：在PubMed等学术搜索引擎上进行文献检索，使用关键词“skin cells”、“epidermal cells”、“keratinocytes”、“melanocytes”等，可以找到相关研究，其中常用的细胞株可能会被提到。到细胞库网站上搜索相关的细胞株

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问疫苗效果的细胞免疫有哪些新指标可以监测？

loveliufudan

1.细胞因子水平：在疫苗接种后，特异性T细胞可以分泌多种细胞因子（如干扰素γ、白介素2、白介素4等），这些细胞因子可以促进B细胞激活、增殖和分化，进而促进抗体产生。因此，测量疫苗接种后特异性T细胞分泌的细胞因子水平，可以作为一种评估细胞免疫效果的指标。2.T细胞亚群分布：不同类型的T细胞在免疫应答中具有不同的功能，如CD4+ T辅助细胞可以促进B细胞激活和分化，而CD8+ T细胞可以直接杀伤病原体

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问新手求助单细胞RNA测序？

loveliufudan

在进行单细胞RNA测序前，通常需要同时提取包括细胞核RNA和细胞液RNA在内的所有RNA种类。因为RNA分布在不同的细胞组分中，细胞核RNA和细胞液RNA具有不同的生物学功能，因此同时提取这两种RNA，可以全面了解单个细胞的转录本信息。至于细胞核RNA的提取方法，可以使用一些商业化的试剂盒。这些试剂盒可以通过使用异丙醇/氯仿分离细胞核和细胞液，将细胞核RNA和细胞液RNA分离。除此之外，也可以使用

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问分别用不跑熔解曲线的QPCR的产物和跑了熔解曲线的产物（都是染料法），去做跑胶做鉴定，这两种的结果会有什么区别？

loveliufudan

不跑熔解曲线的qPCR产物和跑了熔解曲线的qPCR产物在跑胶鉴定上可能会有一些区别，这取决于具体的实验条件和实验设计。如果两种产物中所扩增的目标序列是相同的，并且扩增效率和特异性也相同，那么这两种产物在跑胶鉴定上可能没有明显的差异。这是因为，无论是哪种产物，都是在qPCR反应中被扩增出来的，它们在跑胶鉴定上应该会呈现出相同的带型和强度。但是，如果两种产物的实验条件和实验设计存在差异，那么它们在跑胶

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问RNA反转录之后的cDNA跑胶该选择多大的marker?

loveliufudan

一般而言，可以根据已知目标基因的长度来选择 Marker 的大小。如果你希望检测的目标 DNA 片段在 100bp-1000bp 左右，则建议选择 100bp DNA ladder 或者 1kb DNA ladder 作为 Marker。如果你希望检测的目标 DNA 片段比较小，则可以选择 50bp DNA ladder 作为 Marker。因此，选择合适大小的 Marker，能够更好地检测出期望

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问EMSA实验中单独分析标记DNA可见条带（DNA已标记biotin），但1.5u g纯化蛋白和探针标记的DAN混合后上样无带

loveliufudan

这可能是由于以下原因之一导致的：可能存在过多的非特异性结合蛋白或污染物，导致特异性带的信号被掩盖或者丧失。这种情况下，我们建议优化实验条件，如调整反应温度、缓冲液组成、盐浓度、探针和蛋白的比例等，以最大限度地减少非特异性结合。没有充分优化 EMSA 实验条件，导致探针和蛋白的结合比例过低，无法形成特异性带。在这种情况下，建议尝试优化 EMSA 实验条件，以最大限度地增强探针和蛋白之间的结合，例如调

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问体外培养巨噬细胞过程中，巨噬细胞的形态发生明显变化，体积变大。求助下这种情况是否正常？

loveliufudan

在培养的早期阶段，巨噬细胞可能会分泌多种细胞因子，通过细胞外基质与其他细胞进行交流，此时巨噬细胞的体积可能会逐渐增大。此外，当巨噬细胞处于激活状态时，它们的形态也可能会发生改变，包括伸长、分枝和细胞质的增加等。

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问C2c12细胞培养过程中遇到的问题？

lyang556

可以检测一下支原体，看看是不是支原体污染。也可能是培养基问题。

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问细胞培养过程中的一个疑问求助？

loveliufudan

对于其他pH缓冲系统，例如HEPES、MES和PIPES等，通常不需要使用二氧化碳培养箱来维持pH。这是因为这些pH缓冲体系不会受到CO2的影响，可以在常规的CO2无菌培养箱中稳定地维持pH值。不过，在培养细胞时，还是需要注意使用适当的pH缓冲系统，并遵循相应的操作指南，以确保细胞的正常生长和功能。

3 回答344 围观

问蛋白包被试纸条，干燥几天之后出现黄色条带

sswei

硝酸纤维素膜（nitrocellulosefiltermembrane，简称NC膜），在胶体金试纸中用做C/T线的承载体，同时也是免疫反应的发生处。转膜后nc膜变黄是因为是dov、色母等添加剂发生反应所致，需更换以免影响后续实验。

3 回答371 围观

问这是什么细胞污染

huarenqiang5

你这个主要考虑是支原体污染，建议及时处理。

3 回答285 围观

问实验用药和临床用药一样吗

sswei

实验用药是经过研究针对某些特定疾病有特定疗效的药物,这种药物主要应用于实验,但是由于对这种药物的性能不是完全的了解,以及针对不同人体,,不同的药物配伍是否会产生其他不良反映等问题还没有确切的答案,所以这种药物不被国药局正式认可以及允许大规模的生产。而临床用药则是经过国药局认可注册的，可以用于实验用药。

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问内参GAPDH条带锯齿状，别人跑的都是直的

伏研飞2023

可能是胶的问题没凝好，也可能是电泳电压太大，主要可能还是配胶电泳的问题？

4 回答538 围观

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