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        【求助】ELISA检测STC-1细胞上清中激素实验问题

        相关实验:表达蛋白检测实验

        user-title

        7跑快点

        使用ELISA检测STC-1细胞上清中GLP-1、CCK、PYY,吸光度均在检测下限附近或更低接近空白吸光度。我是加药干预后24h收集上清检测的,是否考虑蛋白降解原因?该不该加蛋白酶抑制剂呢?因为目前参考的文献没有提及加蛋白酶抑制剂且未干预组都能正常测出,不过干预后的采样时间比我设置的要短。

        有没有做过的前辈大佬指点一下迷津啊,求。

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        3 个回答

        user-title

        土井挞克树

        有帮助

        根据你的描述大概率就是蛋白降解的问题。建议加入蛋白酶抑制剂且减少干预时间

        user-title

        loveliufudan

        有帮助

        ELISA检测吸光度过低可能有多种原因,其中包括蛋白质降解、稀释过高、实验操作不当等。考虑到您检测的是细胞上清中GLP-1、CCK、PYY等蛋白质,蛋白质降解可能是一个可能的原因。

        如果您怀疑蛋白质降解可能影响ELISA检测结果,可以考虑加入蛋白酶抑制剂来保护蛋白质。蛋白酶抑制剂可以避免蛋白质在细胞上清中被降解,提高样品中蛋白质的浓度和稳定性。

        另外,您也可以考虑调整实验条件,如缩短采样时间、降低稀释倍数等,以获得更准确的ELISA结果。同时,也需要仔细检查实验操作步骤是否正确,例如洗涤次数、加样量、反应时间等,以确保实验操作的准确性。

        user-title

        橙汁儿青柠味

        有帮助

        一般是不需要蛋白酶抑制剂的,主要考虑刺激的剂量和时间,另外一个是可以适量减少培养基,比如只添加一般的培养基,这样产物浓度就高一点了

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