实验问答

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科研学霸天团，48小时有问必答

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问原代细胞实验中，培养液的PH值变化太快，可能是什么原因导致的？

loveliufudan

原代细胞的培养条件非常重要，其中培养液的pH值是一个重要的因素。如果培养液的pH值变化太快，可能有以下几种原因：细胞代谢产物的积累：细胞在培养基中生长繁殖时会产生代谢废物，这些代谢产物会改变培养基的pH值。如果培养基中细胞密度较高，代谢产物积累的速度就会更快，导致pH值的变化更加剧烈。培养液的缓冲能力不足：缓冲液是调节pH值的重要组成部分，如果培养液中缓冲能力不足，就会导致pH值的变化过快。气体平

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问求助:请问这个logistic回归分析中Hb和ALB的结果是不是有问题呀？

loveliufudan

在 logistic 回归分析中，自变量的系数 b 的符号取决于因变量的编码方式。当因变量为 1 或 True 时，b 值为正表示自变量对结果变量的值产生正向影响；反之，b 值为负表示自变量对结果变量的值产生负向影响。因此，在您的情况下，如果衰弱编码为 1，则您期望 HB 和 ALB 的 b 值为正，OR 值应大于 1。如果您的结果与此不符，可能需要重新检查数据和代码，或者尝试不同的编码方式。需要

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问为什么包病毒收的上清液很黄，但是离心完的上清液很红？

loveliufudan

黄色的上清液可能是由于胆固醇等脂质类物质或者其他代谢产物的积累导致的。如果在48h和72h收上清液时都出现了这种情况，可能与细胞类型和病毒载体有关。至于上清液离心后呈现红色，并且病毒沉淀很少，这可能是由于以下原因：剩余血清的影响：如果病毒载体中残留了较多的血清成分，在病毒沉淀时可能会与病毒一起沉淀下来，从而使上清液呈现出红色。此外，血清的蛋白质和其它成分可能会干扰病毒的沉淀和浓缩。病毒的沉淀能力：

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问请问有用过IPP软件计算肾小球Masson染色后的胶原沉积积分CVF，具体的操作步骤是什么？

loveliufudan

1.打开IPP软件，导入Masson染色后的图像文件，将图像转换成灰度图像。2.选择“Measure”菜单，点击“Set Scale”选项，设置图像的比例尺。3.选择“ROI”菜单，使用鼠标或者其它工具选定感兴趣的区域，即肾小球区域。4.选择“Threshold”菜单，设置图像阈值，以分离胶原和其它组织成分。可以使用自动阈值或手动调整阈值的方式。5.点击“Analyze”菜单，选择“Measure

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问siRNA 敲低技术，敲抵之后是否影响细胞活性？

loveliufudan

关于细胞活性的影响，一般可以通过多种方式来评估，例如细胞增殖实验、细胞凋亡实验、细胞周期分析、细胞迁移实验等。对于敲低之后是否会导致细胞死亡的问题，需要根据具体实验情况来判断。如果目标基因是一种必需的基因或者参与了关键的细胞过程，那么敲低可能会导致细胞死亡。而对于其他的基因，敲低可能只会对细胞的生长和分化产生一定的影响，而不会直接导致细胞死亡。需要注意的是，SiRNA敲低技术虽然是一种有力的工具，

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问使用对苯二甲酸检测空气中的羟基，用日立 F-7000 进行荧光发射光谱检测，实验过程中有何注意事项，仪器参数该如何选取

loveliufudan

在使用日立 F-7000 荧光分光光度计进行荧光发射光谱检测时，需要注意以下几点：检测条件的设置：检测条件需要根据样品的性质和检测目的进行设置。如对于对苯二甲酸检测，可以将激发波长设置为280 nm，发射波长设置为380 nm，同时设置扫描速度、积分时间、波长间隔等参数。样品的制备：样品制备需要注意避免空气中的水分和灰尘等干扰因素的干扰。可以使用干燥器将空气中的水分去除，或者使用吸附管吸附空气中的

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问硫酸铵溶解度25度时饱和溶液为4.1M，即767克/升。分子量为132.12，怎么算的！求解？

loveliufudan

硫酸铵的分子量为 132.12 g/mol。饱和溶液的浓度为 4.1 M，即 4.1 mol/L。饱和溶液的密度为 767 g/L。根据浓度和分子量的关系，可以计算出每升溶液中硫酸铵的质量为：4.1 mol/L × 132.12 g/mol = 542.292 g/L因此，1 L 饱和溶液中硫酸铵的质量为 542.292 g。由于饱和溶液的密度为 767 g/L，因此 1 L 饱和溶液的体积为：1

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问细胞复苏培养过程中，多久可以生长增倍？

loveliufudan

对于常见的细胞系，如HEK293、NIH3T3等，通常需要1-3天左右才能看到明显的生长增殖。对于一些较为敏感或者容易死亡的细胞，如原代细胞、淋巴细胞等，可能需要更长的时间来进行适应和恢复。需要注意的是，在细胞复苏后，生长增殖的速度和质量可能会受到多种因素的影响，如培养基成分、pH值、温度、CO2浓度等。为了获得较好的生长增殖效果，建议在细胞复苏后逐渐适应新的培养环境，并对培养基进行调整和优化。

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问细胞分瓶后第二天悬浮细胞多

此用户已注销

出现漂浮细胞有好几种可能第一是细胞死了，就漂起来了第二是在处理细胞的时候温度变化太大，建议预热培养液如果是用玻璃瓶培养的话改用塑料瓶试试可以半量换液

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问细胞长着长着就污染了，拉丝，然后用支原体检测试剂盒检测为阴性，很莫名其妙

loveliufudan

针对您所描述的情况，细胞长时间培养后出现污染，但支原体检测试剂盒检测为阴性，有可能有以下几个原因：支原体检测试剂盒的灵敏度不够高，未能检测出污染的支原体。虽然支原体检测试剂盒的灵敏度较高，但是有些污染可能存在变异性，检测不出来。污染可能是其他类型的微生物，而不是支原体。细胞污染不仅仅局限于支原体，可能存在其他微生物的污染，例如细菌、真菌等。细胞污染可能已经过度，支原体已经被细胞吞噬或其他细胞已经被

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问悬浮细胞培养前几天很好，冻存到液氮里，在复苏前两天也还好，之后就贴壁了为什么？

loveliufudan

悬浮细胞通常是在无血清培养基中培养的，这种培养基通常不包含血清中含有的黏附因子，因此这些细胞不会黏附在培养皿的底部。当您将这些细胞冻存并重新复苏时，有可能在复苏过程中或者在接种到新的培养皿中的过程中，细胞会受到一些创伤或者应力。这些应力可能会导致细胞产生一些黏附分子或者表达一些黏附因子，这些因子可以使得细胞黏附在培养皿的底部，从而形成贴壁细胞。此外，如果培养皿表面没有很好的预处理，比如没有涂覆一些

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问放在液氮灌里的细胞会被液氮污染嘛？

sswei

因为存放标本或者细胞的过程中，取放提筒的过程中稍有不慎会导致部分物体随着提筒或者提篮的把手顺着把柄流入到液氮罐内，时间稍长不及时进行清洗，会造成沾付在内胆上，会污染细胞，出现杂菌、影响细胞的生长，因此当低温容器使用一段时间以后需要定期进行清洗，这样可降低细胞的污染。

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问细胞培养所使用的FBS需不需要灭活？

loveliufudan

通常情况下，使用的胎牛血清(FBS)不需要进行灭活处理。因为FBS作为培养基中的营养物质来源，其内含有的生物活性物质和细胞因子对于细胞生长和增殖是非常重要的。而进行灭活处理会使这些生物活性物质失去功能，从而影响到细胞的生长和生理活性。但是，如果需要进行一些特定的实验，例如检测病毒或者细胞因子等，需要保证实验体系的无菌和清洁，并排除FBS中存在的病原体或细菌的可能性，那么可以考虑使用经过灭活处理的F

4 回答1108 围观

问大家给药的时候都用有血清的还是无血清的培养基呢？一直不知道哪个比较可靠，谢谢！

sswei

给药时用的是有血清的培养基,因为细胞正常生长需要FBS。

5 回答4369 围观

问细胞传代如何减少后代凋亡问题

loveliufudan

在细胞传代的过程中，后代细胞凋亡是一个普遍存在的问题。以下是一些可能有帮助的方法来减少后代细胞凋亡问题：1.控制细胞密度：在进行细胞传代时，应该控制细胞密度。如果细胞密度过高，会导致细胞营养不足和相互竞争，从而增加细胞死亡率。如果细胞密度过低，则会导致细胞无法良好地生长和分裂。因此，应该根据细胞类型和生长特性来确定适当的细胞密度。2.选择合适的培养基：合适的培养基可以提供必要的营养物质和适宜的生长

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问单细胞转录组测序新手求助？

loveliufudan

一般来说，对于细胞核/细胞质比例较高的细胞（如血细胞），选择置备细胞核悬液可以提高RNA测序的灵敏度和特异性；对于细胞核/细胞质比例较低的细胞（如神经元），选择置备细胞质悬液可以获得更全面的转录本信息。此外，对于一些有细胞壁或有刺突的细胞（如酵母菌或植物细胞），需要先进行细胞壁或细胞膜的破碎，然后分别置备细胞核悬液和细胞质悬液。至于哪种悬液的RNA质量更高，一般来说，置备细胞核悬液可以获得更高的R

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问挑阳性克隆进行扩繁提质粒跑电泳。请教为什么质粒的条带与质粒大小条带不一致。用的10000的marker，但质粒大小为7500bp

loveliufudan

如果你用的是10000的marker，但质粒大小为7500bp，可能是marker大小和实际质粒大小不匹配导致的。建议选择大小适当的marker，并根据实际质粒大小进行优化和调整，以确保结果的准确性。

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问WB结果不对也不知道原因。

loveliufudan

由于你提到同样的样品在立春红染色中也出现了类似的结果，只有一条泳道正常，那么很可能是样品中的蛋白质含量或质量的问题导致的。以下是一些可能的原因：蛋白质含量不足：如果样品中的蛋白质含量不足，那么Western blot检测时就可能出现很弱或无法检测到的条带。可以尝试增大加载样品的量，或者使用更敏感的检测方法。蛋白质质量不佳：如果样品中的蛋白质质量较差，那么就可能会导致不同泳道之间的信号强度差异很大。

3 回答647 围观

问目前最先进的测单质硒的方法依然是DAN荧光法嘛？

loveliufudan

目前最常用的测定单质硒的方法是氢化物发生-石墨炉原子吸收光谱法（Hydride Generation-Graphite Furnace Atomic Absorption Spectroscopy，HG-GFAAS）和高效液相色谱法（High Performance Liquid Chromatography，HPLC）。与DAAN荧光法相比，这两种方法具有更高的灵敏度、准确性和特异性。虽然DAA

3 回答461 围观

问各位大佬，有无创取微量组织的方法吗

sswei

玻片压诊法，皮肤胶带粘贴法等无创取微量皮肤组织。

2 回答465 围观

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