实验问答

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科研学霸天团，48小时有问必答

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问【求助】氧糖剥夺/再灌注（OGD/R）

loveliufudan

有以下几点建议：在精密培养箱进行实验时，建议打开96孔板的盖子。因为在密闭的条件下，细胞间的气体交换会受到限制，可能影响细胞生长和实验结果。但是，在操作过程中要保持无菌操作的规范，避免污染。OGD/R（oxygen-glucose deprivation/reoxygenation）模型确实会导致一部分细胞死亡，但也可能有一部分细胞存活。CCK-8方法主要用于评估细胞存活率，因此您可以继续使用CC

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问lps与caco2求问

loveliufudan

黏附蛋白的表达和分泌受到多种因素的影响，可能不仅仅受到LPS的影响。因此，黏附蛋白没有下降可能是由于以下几个原因：1.实验操作不当：在进行实验时，可能存在操作不当，例如LPS的处理浓度、时间不够或者细胞密度不够等。需要确保实验操作的准确性和一致性。2.基因表达变化需要一定的时间：黏附蛋白的表达和分泌可能需要一定的时间才能发生变化。在LPS处理Caco-2细胞24小时后可能仍未观察到显著的黏附蛋白表

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问求教细胞真菌污染处理方案

loveliufudan

首先，建议立即丢弃污染的细胞，以免污染扩散至其他培养皿。对于培养箱的清洁和消毒，可以先用70%酒精擦拭培养箱内部，然后放入一个装有70%酒精的容器，关闭培养箱门，让酒精挥发，消毒30分钟左右。紧接着，打开培养箱门通风，待酒精挥发后，再用紫外灯照射30分钟。对于培养架，已经采取了照紫外的措施，您可以再用70%酒精擦拭一下，消毒效果会更好。关于培养箱无法调到60°C的问题，您可以考虑使用干燥箱（如有条

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问求助| 请问图中有小鼠小肠隐窝细胞吗？最近在做类器官培养，总是分离不出隐窝

loveliufudan

如果您正在尝试分离小肠隐窝细胞以进行类器官培养，以下是一些可能有用的建议：1.使用适当的消化酶：小肠隐窝细胞位于上皮层基底部，因此需要消化酶渗透到上皮层下面。试着使用适当浓度和时间的消化酶，以获得更好的细胞分离。2.优化组织分离条件：能够获得更好的细胞分离的关键是优化组织分离条件，这可能包括不同的消化酶浓度，消化时间，温度和机械强度。3.选择适当的分离方法：不同的分离方法适用于不同类型的细胞。

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问求助，科研

loveliufudan

LC2细胞（Lung type 2 innate lymphoid cells）是一种新发现的免疫细胞，其分离和培养方法尚不是很成熟。目前，LC2细胞的分离主要依靠免疫细胞分选技术，如磁珠分选、荧光细胞分选等。这些方法可以利用特异性标记的抗体识别和分离LC2细胞。关于LC2细胞的培养，由于这种细胞是一种新发现的免疫细胞，其生物学特性和培养条件还需要进一步研究和优化。目前，研究者们正在尝试使用不同的

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问求助，为什么这个细胞的周期拟合出来很奇怪

loveliufudan

染色时间过长可能会影响细胞染色的效果，尤其是染色剂的扩散和细胞内染色效率的降低。建议您在流式细胞仪实验中，尽量严格控制各个步骤的时间，避免染色时间过长。一般来说，PI染色的时间可以控制在15-30分钟之间，根据细胞类型和实验要求适当调整。另外，第二个出现的异常情况可能也与其状态有关。不同的细胞株、细胞类型和生长条件下的细胞状态可能不同，这可能会对细胞周期和染色结果产生影响。建议您在进行流式细胞仪实

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问细胞培养过程中，长满了之后，进行传代，用pbs洗了一片，发现细胞都洗没了，是什么原因呢

juyue2010

细胞出现层叠，细胞贴壁力弱，容易洗下来

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问成管实验 c166细胞

土井挞克树

内皮相关实验c166都可以做，也可以做成管实验

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问在第二向电泳中，为什么溴氛蓝条带都跑到玻璃板下缘，蛋白质却只跑一半，怎么弄？

loveliufudan

在第二向电泳中，溴氟蓝条带跑到玻璃板下缘，蛋白质却只跑一半可能有以下原因：电泳时间不足：如果电泳时间不足，可能会导致溴氟蓝染料条带和蛋白质未被完全迁移。建议增加电泳时间，以确保条带和蛋白质被完全迁移。蛋白质溶液中含有大量盐或油脂：如果蛋白质溶液中含有大量盐或油脂，可能会影响电泳的迁移效果，从而导致蛋白质只跑一半。建议在蛋白质提取过程中彻底去除盐和油脂，或者使用其他蛋白质提取方法。电场强度不合适：如

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问关于使用三氯醋酸沉淀法，如何解决蛋白质难于重悬？

loveliufudan

以下是一些可能的解决方案：增加重悬缓冲液的含量：将重悬缓冲液的体积增加，可以减少蛋白质在溶液中的浓度，有利于重悬。通常，可以将重悬缓冲液的体积增加到蛋白质沉淀物的5-10倍。增加重悬缓冲液中的蛋白质还原剂：将重悬缓冲液中的蛋白质还原剂浓度增加，有助于蛋白质的还原和重悬。常用的蛋白质还原剂包括二巯基乙醇（DTE）和二巯基丙酸（DTT）等。增加重悬缓冲液的pH值：增加重悬缓冲液的pH值可以改变蛋白质的

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问这篇题为RNA介导的基因沉默实验中的注解和引用文献在哪里可以看到？

土井挞克树

可以在pubmed和中国知网上搜索到这篇文献。

1 回答393 围观

问请问一下，做的是氧化石墨烯–COOH和胶原蛋白–NH2反应，用95%乙醇做溶剂，文献中没看到要调pH，这个反应不调ph影响大吗

sswei

这个反应要调PH，不调PH有影响。

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问定点突变之后同源重组完毕，电泳显示有条带，为什么转化后的板子不长菌落

sswei

转化的时候有误，可以重新实验。目的基因和载体都切开，特别是目的基因如果是PCR后直接酶切效率会较低；载体上两个酶切位点连在一起，感受态的效率问题，转化过程对不对，如抗生素加的对不对。

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问使用WB检测TERT蛋白，为什么分子量低于预期，为什么出现杂带！

sswei

分子量比预期低可能是由以下几个原因引起的：细胞提取和蛋白质浓度问题：如果提取细胞的质量和/或数量不足，或者蛋白质提取过程中出现问题，会导致蛋白质的含量不足。这可能会导致目的蛋白的表达水平低于预期。抗体问题：WB实验使用抗体来检测目的蛋白。如果使用的抗体出现问题，例如批次差异或失效，也可能导致目的蛋白的表达水平低于预期。转录后修饰问题：转录后修饰是指在蛋白翻译完成后对蛋白进行修饰，例如磷酸化、乙酰化

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问PCR扩增后期条带很淡

loveliufudan

最可能的原因可能是模板DNA降解或消失。这可能是由于DNA质量不佳、PCR反应体系中存在抑制因素、PCR反应过程中的外界环境因素（例如温度、时间等）等因素导致的。建议您对实验过程中的样品和反应条件进行全面的评估，包括DNA质量、PCR反应体系的组成和浓度、PCR反应的温度和时间等方面。此外，如果样品存在污染，可能也会影响PCR反应的效果，因此也要注意样品的纯度和质量。最好对PCR产物进行测序确认，

3 回答4724 围观

问小鼠受精卵慢病毒显微注射后发育至2细胞就不发育了怎么回事？

loveliufudan

可能有多种原因，包括慢病毒的毒性、注射技术和实验条件等。首先，慢病毒是一种有机病毒，可以导致宿主细胞死亡，影响胚胎的发育。您使用的带GFP标签的慢病毒浓度在10^6-8的单位，也可能对小鼠受精卵造成了毒性影响。因此，建议您优化慢病毒的浓度和处理方式，以减少慢病毒对胚胎的不良影响。其次，注射技术也可能是一个问题。小鼠受精卵非常脆弱，需要非常小心和精确的技术才能成功进行显微注射。注射的位置、深度和角度

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问对于做盆腔炎大鼠的课题实验研究难嘛？后续的论文好发sci嘛？

土井挞克树

实验难度中等水平，后续还是比较好发文章的

3 回答526 围观

问Flowjo 细胞周期分析为什么显示could not calculate modle

tobebetter123

记得勾选圈中的地方，就会出来图形了。

3 回答2495 围观

问fluo4钙成像为什么会有光晕？

来一起探讨

可以减少荧光染料的用量，同时减少曝光时间、或通过滤光片减少影响。

2 回答441 围观

问journal of advanced nursing求投稿经验

研一打工仔

初审两个月了，还没给回复，一直在Undergoing review阶段

4 回答1331 围观

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