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实验问答

23,121,866 科研人在看

科研学霸天团，48小时有问必答

问蛋白电泳时设置了恒压但是变成恒流电压在不断下降其他人使用电泳仪是能设置恒压，我们不同的是电泳槽，而且电极缓冲液用了一次就发黄为啥。

loveliufudan

如果在进行蛋白电泳时设置了恒压，但实际上电压在不断下降，有可能是由于电泳槽和电极之间存在电阻或连接不良等问题导致的。此时，电流可能会持续增加，直至超过预设的电流限制，从而导致恒压模式自动转变为恒流模式。如果其他人使用电泳仪可以设置恒压，而您的电泳槽却不行，可能是由于电泳槽的设计、材质等方面存在问题。不同的电泳仪和电泳槽可能有不同的电流密度、电极距离等参数，需要根据实际情况和要求进行调整和优化。至于

4 回答2830 围观

问DNA-RNA、DNA甲基化-RNA、核小体定位-DNA甲基化-RNA联合检测的方法通量低、成本高。有哪些更合适的方法？

loveliufudan

以下是一些可能更适合的方法：1.RNA-Seq和ChIP-SeqRNA-Seq是一种高通量的转录组测序技术，可以用于检测RNA表达水平和差异表达基因。与DNA-RNA联合测序相比，RNA-Seq更适合检测转录本的数量和差异，而且通量更高、成本更低。ChIP-Seq是一种高通量的染色质免疫共沉淀测序技术，可以用于检测染色质修饰和转录因子结合位点。与核小体定位-DNA甲基化-RNA联合检测相比，ChI

2 回答487 围观

问对于无法实现单细胞分辨率的空间组学技术，可以通过哪些方法识别特定组织区域的细胞成分？

loveliufudan

可以采用以下方法来识别特定组织区域的细胞成分：免疫组化：通过免疫组化技术可以使用特异性抗体对细胞标记物进行标记，从而识别出特定类型的细胞。例如，可以使用特异性抗体来标记神经元、胶质细胞、免疫细胞等细胞类型。组织染色：染色方法也是一种识别特定组织区域细胞成分的重要方法，例如苏木精-伊红染色可以染色出细胞核和细胞质等细胞组分。基因表达分析：可以通过RNA测序和qPCR等技术对特定细胞类型的基因表达进行

2 回答366 围观

问单细胞多组学scTrio-seq是否可以同时测转录组、基因组和甲基化？

loveliufudan

是的，单细胞多组学sCTrio-seq技术可以同时测定单个细胞的转录组、基因组和甲基化。这项技术利用了单细胞测序中的三联体序列标记技术，即在同一细胞中同时分离出DNA、RNA和蛋白质，并在其上加上三联体序列标记进行测序。通过sCTrio-seq技术，可以同时测定单个细胞的基因组序列、转录组表达和DNA甲基化情况。在测序分析过程中，三联体序列标记可以帮助将RNA-seq、WGS和WGBS的数据进行整

2 回答435 围观

问whole mount免疫荧光染色抗体孵育时3D细胞团散了

loveliufudan

下面是一些可能的原因：固定过程中使用的PFA浓度或固定时间过长可能会导致细胞球破裂。你使用了4%的PFA，这个浓度对于不同的细胞类型可能有不同的影响，过浓的PFA浓度或固定时间过长可能会破坏细胞膜，导致细胞球破裂。建议使用更低浓度的PFA，比如1% PFA，在更短时间内固定细胞。梯度转移过程中可能会出现问题。转移到MeOH中的过程可能会导致细胞球破裂。此外，转移到PBS的过程中，可能出现过度搅拌或

2 回答1374 围观

问鸟类血液中的血浆与血细胞的离心，转速应该用多少呀？时长多少呢？

loveliufudan

对于鸟类血液，根据常规操作经验，一般建议离心转速在2000-3000g之间，时间在10-15分钟，这样可以较好地分离血浆和血细胞。但是不同种类的鸟类血液的离心条件可能会有所不同，需要根据实际情况进行优化。对于你描述的操作，离心转速和时间可能过高，导致血细胞被过度离心，破坏了血细胞结构，无法得到理想的血细胞样本。建议你在进行血液离心的时候，首先需要了解血液样本的具体特征，根据样本的特征和需要分离的成

2 回答972 围观

问（实时荧光定量PCR）非竞争性内标定量中间的公式（从CT值到浓度）是怎么确定的？怎么建立模型？

loveliufudan

在实时荧光定量PCR中，常用的非竞争性内标法是采用外源性参比基因或人工合成的内标分子作为定量的基准，通过比较参考基因和目标基因的荧光信号差异，计算出目标基因的相对表达量。具体的公式和建模方法如下：1.构建标准曲线首先，需要在实验中构建一个标准曲线，将已知浓度的DNA模板进行反转录合成cDNA，然后进行实时荧光定量PCR，测量荧光信号与初始DNA浓度的对数之间的关系。根据标准曲线，可以通过计算目标基

2 回答726 围观

问基于单链DNA构建的PROTAC靶向降解膜蛋白中，稀释单链DNA的培养基的血清浓度一般不要高于百分之多少

loveliufudan

一般来说，建议将血清浓度控制在1%以下。如果实验条件允许，可以将血清浓度降至0.1%或更低。需要注意的是，血清的成分非常复杂，包括多种蛋白质、脂质、激素、生长因子等，这些成分可能会与实验所需的蛋白质或DNA结合，从而影响实验结果。因此，在进行基于单链DNA构建的PROTAC实验时，应该根据实验需要和要求进行血清浓度的优化和控制，以获得最佳的实验结果。

2 回答334 围观

问免疫印迹单组分TMB沉淀型显色液

loveliufudan

单组分TMB显色液是一种常用的酶标记试剂，可以用于检测Western blot和ELISA等实验中的蛋白质。使用单组分TMB显色液在膜上显示的条带较浅，可能是由于显色液的浓度不足、显色时间不够长等原因造成的。为了获得更深的显色效果，您可以尝试以下方法：增加显色液的浓度：可以尝试增加单组分TMB显色液的浓度，但需注意不要过度稀释，以避免背景杂色增加。延长显色时间：可以延长显色时间，但不要过度延长时间

2 回答1281 围观

问提问用AGS做慢病毒转染嘌呤霉素的推荐浓度

huarenqiang5

用AGS做慢病毒转染嘌呤霉素的推荐浓度一般是1－5ug/ml。

4 回答1050 围观

问HPLC和指纹图谱有什么具体的区别吗，它们检测样品的条件可以通用吗

loveliufudan

HPLC（高效液相色谱）和指纹图谱是两种不同的化学分析方法，其检测原理、应用范围和检测条件都有所不同。HPLC是一种常用的分离和纯化技术，它基于化学物质在流动相和固定相之间的差异进行分离，通常用于分离和检测化学物质的纯度、含量、结构和化学性质等。HPLC的检测条件需要根据样品的性质和要求进行优化和调整，如流动相的组成、流速、温度、压力等参数。指纹图谱是一种基于多成分分析的质量控制方法，它通过分析样

2 回答4175 围观

问您好，想测大脑PAG区的免疫组化，切片应如何切，按照哪个方向切呢

loveliufudan

通常情况下，进行PAG区免疫组化的切片方向是冠状面（coronal section），即从前向后切割大脑组织。在进行冠状面切片时，需要先将大脑取出，将其冷冻或用固定液固定，并进行切片。每个切片的厚度一般为20-50微米，取决于研究的需要。切片的位置应该包括PAG区，即位于中脑背侧，与四联体（tectum）和中央灰质（central gray matter）相邻的区域。

2 回答554 围观

问请问构建基因后进行鉴定，如何通过打转基因果蝇进行鉴定验证？怎么判断没有得到相应的转基因果蝇？为什么会没有呢？

loveliufudan

首先，可以通过PCR扩增和测序来检测果蝇基因组中是否存在转基因序列。在PCR反应中，利用一对引物特异性地扩增目标转基因序列。如果扩增出来了，就说明果蝇基因组中含有该转基因。此外，可以利用Southern blot等分子生物学技术进一步验证转基因果蝇的鉴定结果。其次，生物学表型鉴定方法也是常用的鉴定转基因果蝇的方法之一。由于转基因果蝇通常会表现出一些不同于野生型果蝇的生物学特征，如体型、行为、生长发

2 回答641 围观

问胰酶消化时长具体多长时间最好呢？

huarenqiang5

胰酶消化时长建议2－3分钟比较合适。

6 回答5117 围观

问神经元细胞核与非神经元细胞核有什么区别？

sswei

神经元细胞核特点球形，较大，着色较淡，核仁明显。非神经元细胞拉特点是核外形各异，大小不一，着色深浅不一，核仁染色稍淡。

3 回答792 围观

问请问，谁做过FD-4的肠粘膜渗透性实验，求具体方法

土井挞克树

需要灌胃，不需要灌肠，后续需要取肠组织

3 回答3379 围观

问求助wb内参条带问题

sswei

可能有转模不均匀，抗体特异性不高等原因

3 回答981 围观

问wb成这样是什么原因呀是蛋白样品上多了吗

sswei

存在蛋白样品上样量太多，存在交叉反应或抗体浓度太高等原因。

4 回答424 围观

问同一批样本，目的基因测出的ct值20-22，但是内参的ct在35-38左右，是怎么回事？求大神解答

dxy_4aa38auq

不同实验不同细胞内参可能会有变化的，而且35-38太不稳定了，需要重新找一个，可以试试别的比如HPRT1

2 回答498 围观

问脐带细胞不贴壁，分裂爬出来的少，有哪些原因？

GATARX

也许是细胞培养基不能够支持细胞生长，可以多加点血清试试！

4 回答567 围观

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