• 我要登录|
  • 免费注册
    |
  • 我的丁香通
    • 企业机构:
    • 成为企业机构
    • 个人用户:
    • 个人中心
  • 移动端
    移动端
丁香通 logo丁香实验_LOGO
搜实验

    大家都在搜

      大家都在搜

        0 人通过求购买到了急需的产品
        免费发布求购
        发布求购

        ALP标记抗体方法步骤?

        相关实验:化学发光免疫分析实验

        user-title

        阿鸟逢考必过

        看文献说戊二醛标记法标记效率不高,我们用过碘酸钠法没有标记上,想问下大家有过碘酸钠或者双功能标记法的具体步骤吗?

        wx-share
        分享

        2 个回答

        user-title

        土井挞克树

        有帮助

        流程:过碘酸钠氧化-乙二醇终止-加入抗体-碳酸盐透析-硼氢化钠还原-硫酸铵沉淀-溶解透析。

        user-title

        阿鸟逢考必过user-title

        方便问下具体的操作步骤吗?而且硼氢化钠属于危险品我们暂时买不到,请问能用其他的试剂替代吗?

        user-title

        loveliufudan

        有帮助

        碘酸钠法和双功能标记法都是常用的ALP标记抗体方法,以下是它们的具体步骤:

        碘酸钠法:

        用PBS等缓冲液洗涤细胞样品,使其附着于载玻片上。

        用PBS等缓冲液固定细胞样品,使其不发生变形。

        加入酸性碳酸钠缓冲液,将细胞中的内源性酶灭活,然后洗涤细胞样品。

        加入一定浓度的碘酸钠,将其与细胞表面的ALP结合。

        洗涤细胞样品,去除未结合的碘酸钠。

        加入亚甲基蓝或BCIP/NBT染色剂,ALP结合的碘酸钠在染色剂的作用下产生颜色。

        加入1%甲醛或PBS等缓冲液停止反应,然后洗涤细胞样品。

        将载玻片反面涂上封片胶,覆盖在细胞样品上,然后放置于显微镜下观察和拍照。

        双功能标记法:

        用PBS等缓冲液洗涤细胞样品,使其附着于载玻片上。

        用PBS等缓冲液固定细胞样品,使其不发生变形。

        加入含有ALP标记物的二抗,使其与目标抗体结合。

        加入含有荧光素底物的二抗,使其与ALP结合并发生荧光素化反应。

        洗涤细胞样品,去除未结合的标记物和底物。

        用甲醛或PBS等缓冲液停止反应,然后洗涤细胞样品。

        将载玻片反面涂上封片胶,覆盖在细胞样品上,然后放置于荧光显微镜下观察和拍照。


        user-title

        阿鸟逢考必过user-title

        感谢,不过我们做的不是这种抗体标记呢。

        ad image
        提问
        扫一扫
        丁香实验小程序二维码
        实验小助手
        丁香实验公众号二维码
        扫码领资料
        反馈
        TOP
        打开小程序