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实验问答

31,777,843 科研人在看

问GraphPadprism计算IC50后，从哪里可以看到标准偏差。或者抗肿瘤活性做完Ic50了。那个文献里面的±标准偏差是怎么算。

土井挞克树

1、打开GraphPadPrism5．0软件，点击column．2、然后点击create3、在title输入组别，在Y下面输入实验数据4、点击左侧graphs底下的data15、点击analyze6、选择columnstastics点击OK，弹出如下界面这个界面就有标准偏差了

3 回答12856 围观

问DNA斑点杂交加底物溶液为什么30min内甚至7小时都无斑点？是静止孵育吗

土井挞克树

可能是阻断封闭不足，建议将经过杂交和严格清洗后的膜用马来酸缓冲液漂洗1~5min；将膜在l00ul阻断液中孵育30min。

2 回答636 围观

问海参提蛋白前脱色脱脂方法

sswei

传统脱色方法包括活性炭吸附法等，但是这些方法损失率高，利用膜分离法脱色则会克服传统脱色方法缺点。

3 回答1671 围观

问pcr不起峰是什么原因

loveliufudan

PCR不出现特定的放大产物峰可能由以下原因引起： 1. 引物问题：引物是PCR反应中的关键组成部分。如果引物设计不当，可能会导致PCR不起峰或产物低效。检查引物序列是否正确，长度是否合适，是否存在互补、自身二聚等问题。 2. DNA模板问题：DNA模板可能存在质量问题，如降解、含有PCR抑制物质或浓度过低。检查DNA提取过程、保存条件和质量，确保模板DNA的质量良好且浓度适宜。 3. PCR条件问

3 回答1859 围观

问这个bw 是什么意思

土井挞克树

图中的bw是体重的意思。每日50mg/kg bw

3 回答3274 围观

问MCF-7细胞传了四代，还是很慢很慢是为什么呢，正常这个细胞应该一天一传才对，可是放在小培养瓶里四天都长不满。

loveliufudan

如果你的MCF-7细胞在经过四代传代后仍然生长缓慢，可能有以下几个原因导致： 1. 细胞老化：细胞在不断传代过程中会经历老化现象，细胞增殖能力可能会降低。这可能导致细胞生长速度减缓或停滞。 2. 培养条件不适合：MCF-7细胞对培养条件比较敏感，需要适宜的培养基、适当的温度和CO2浓度等。如果培养条件不符合细胞的需求，细胞的生长速度可能会受到影响。 3. 感染或污染：细胞培养过程中，可能会出现细菌

3 回答1395 围观

问姐妹们求救🆘 细胞迁移实验新手小白在线请教我们想做巨噬细胞给药预处理在诱导炎症在哪个步骤后划痕呢还是把处理后的细胞重悬

dxy_mqg1dtg8

在诱导炎症的实验中，通常在将巨噬细胞处理后，再进行划痕或其他诱导炎症的操作，以观察药物或预处理的效果。因此，在诱导炎症之前，应该先将巨噬细胞进行预处理，然后将处理后的细胞重悬，进行后续的实验操作。处理后的细胞可以在适当的时间点进行划痕或其他诱导炎症的实验操作，观察预处理的效果。

3 回答616 围观

问求问双倒数法测酶活计算步骤？

土井挞克树

双倒数作图法(double reciprocal plot),又称为林-贝氏(Lineweaver- Burk)作图法 1.Vmax[S] Km+[S] 两边同取倒数 2.Km 1/V= + 1/Vmax 1/[S] Vmax (林-贝氏方程) 3.V= 1/V 1/Vmax -1/Km 1/[S] 以“1/v”对“1/[s]”作图,直线与x 轴交点即为-1/Km。4.代入回归方程求得酶活曲线

2 回答3505 围观

问求教，我跑的qpcr，同一组引物却有不同的Tm值，可能是什么原因？

土井挞克树

可能是计算方法不同，Tm值相差太大可以进行Touchdown摸索最佳的反应温度。

3 回答4448 围观

问实验小白，请问如何获取要培养的细胞（例如：单个核细胞；cd14+单核细胞）原代或细胞系的培养基信息，需要添加的细胞因子等信息？

天南9HRM

3 回答426 围观

问基因的扩增，总是跑不出来，是什么原因呢？

土井挞克树

扩增失败，大概率是引物的原因。建议：拿到新引物后应从 Tm- 5℃ 寻找其适宜的扩增温度，在某温度起为特异性扩增。然后，在特异性扩增的温度下检测扩增效率：将 cDNA 梯度稀释（一般为 2×），测试稀释后的样本 Ct 值差异是否为 1 左右。1、若差值为 1，则扩增效率良好，可进行正式实验。2、若在特异性扩增的温度范围内不能使 Ct 值差异为 1，则需考虑重新设计引物

4 回答2471 围观

问细胞实验中如何确定抑制剂和激动剂浓度？和IC50有关系吗？

feixue7758527w

抑制剂和激动剂浓度还是要根据文献进行选择的，如果没有相关文献，只能自己从中间浓度慢慢摸索的。IC50也是建议从5倍开始摸索。

3 回答2529 围观

问关于实验中高、中、低剂量分组时，数据的差异

loveliufudan

在动物或细胞实验中，出现不一致或混乱的结果可能是由于多种因素造成的。以下是一些可能的解释： 1. 剂量响应曲线的非线性：某些药物或化合物可能会表现出非线性的剂量-效应关系，即不同剂量下的效果可能不同。这可能是由于药物的机制复杂性或细胞的生理反应的非线性性质引起的。 2. 细胞或动物个体差异：个体之间的差异可能导致对剂量的响应不同。在相同剂量下，某些个体可能对药物更敏感，而其他个体可能对药物反应较弱

3 回答4500 围观

问为什么我用再障患者骨髓血提的原代细胞长势很差？

dxy_mqg1dtg8

在再障患者的骨髓中，正常造血细胞的数量会明显减少，而癌细胞的数量则会增加。因此，再障患者的骨髓中的原代细胞生长受到了癌细胞的影响，其生长势可能会受到抑制，从而导致生长势较差。此外，再障患者的骨髓环境可能也发生了改变，造成细胞生长环境的不适宜，也可能会影响原代细胞的生长势。如果您在进行实验中发现再障患者骨髓血提的原代细胞长势很差，可以尝试以下措施来改善细胞生长情况：1. 改变培养基组成，尝试不同的培

4 回答461 围观

问荧光定量检测CRP试纸，HOOK效应一般出现在什么浓度比较好？

sswei

当抗原抗体出现HOOK时经常会超出检测限而不能准确定量的检测出相关的数值，只有抗原抗体比例合适时才出现最强的反应，在检测限内检测出准确的数值。

3 回答1089 围观

问wb实验在最下方loadibg处有条带，如何去除

loveliufudan

如果你在Western blot实验中发现一些不明的带，可能是由于一系列因素导致的，包括但不限于非特异性结合、蛋白降解产物、抗体的交叉反应等。以下是一些可能的解决策略： 1. 确认一抗的特异性：如果可能，尝试使用另一种一抗或者使用已知阳性和阴性对照来验证一抗的特异性。 2. 改变阻断条件：增加阻断时间，或者改变阻断液的组成。例如，如果你现在使用的是5%牛奶，你可以尝试使用5%BSA，或者使用含有T

3 回答1191 围观

问PCR溶解曲线出不来这是什么原因？

huarenqiang5

考虑以下几点原因:1、引物没有设计好，溶解曲线就是为了区分样品是否有非特异性扩增和初始模板有无被污染的情况，实验室用BIOGHC-PCR检测了DNA，如果出现单一峰且峰值在Tm值位置出现，这就证明没有非特异性扩增，且初始模板没有被污染。2、没有给数据编号，数据在分析的时候需要分组。

3 回答4403 围观

问请帮忙讲解一下AAV DNA的滚环复制，单链是如何成双链的？

loveliufudan

滚环复制的基本过程： 1. 感染宿主细胞：AAV进入宿主细胞后，其单链DNA基因组会被宿主细胞核内的转录因子进行转录，形成mRNA。 2. 产生复制起始位点：转录过程中，AAV基因组的一个特殊区域，即基因组复制起始位点（replication origin），会形成一个短暂的双链DNA结构。 3. 倒转与剪切：复制起始位点的双链DNA结构会通过酶切和倒转的过程，将一个链剪切出来并倒转。 4. 合成

3 回答1591 围观

问求助‖SDS-PAGE蛋白电泳结果怎么看呢？细胞裂解泡的条带有很多条，有的只有一条的呢？

loveliufudan

在一条泳道上看到很多条带，可能表示裂解液中的蛋白质多样性比较高。每条带代表一种或几种分子量相近的蛋白质。带的明亮度通常与该蛋白质的浓度有关，更亮的带表示该蛋白质更丰富。如果在一条泳道上只看到一条带，可能有几种解释： 1. 这可能意味着裂解液中只有一种主要的蛋白质，或者所有其他的蛋白质都在检测限度以下。 2. 如果这是一个验证泳道，可能表明你的抗体非常特异，只检测到了你感兴趣的目标蛋白。 3. 如果

3 回答8845 围观

问国产荧光微球标记抗体稳定性下降

dxy_mqg1dtg8

荧光微球标记稳定性下降可能有以下几个原因：1. 微球质量差：国产微球的质量可能不如进口微球，导致微球的表面粗糙度不一，比表面积不同，固相效果差，导致标记的蛋白易于脱落。2. 微球与蛋白的比例不合适：微球与蛋白的比例不合适可能会导致蛋白在微球表面的分布不均匀，部分蛋白可能会溶解或脱落，导致标记的稳定性降低。3. 固相方法不当：固相方法可能不够完美，导致蛋白没有均匀地附着在微球表面上，或者蛋白分布不均

1 回答1284 围观

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