实验问答

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科研学霸天团，48小时有问必答

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细胞

问RAW264.7巨噬细胞如何培养？

skyye

请问是发现传代多少次以后长出触角呢？其实不管哪类细胞，传代次数多的话都会逐渐老化，形态发生改变或长出触角，Raw264.7也不例外。所以一般建议拿代数早的细胞来完成实验，早期代数的细胞多冻存一些

3 回答606 围观

问想上调小鼠体内notch2蛋白的表达怎么做，有什么药吗？

huarenqiang5

上调小鼠体内notch2蛋白的表达，药物可以选用布地奈德和姜黄素。

3 回答263 围观

问HepG2细胞形态改变，这种情况是怎么了？求解答

sswei

HepG2细胞内容易产生空泡,特别是在融合时,细胞复苏后也可能存在形态不典型的情况,但一般经过几次传代,细胞形态会更加典型稳定,建议传代比例为1:2至1:4,37度胰酶消化2-3分钟。Hep G2细胞内容易产生空泡,属正常现象,多传代几次后,细胞形态更加典型稳定。

3 回答831 围观

问脱色脱脂过程中丙酮试剂可以用其他试剂代替吗

土井挞克树

可以试一试异丙醇，可以替代丙酮进行脱色脱脂

3 回答733 围观

问帮忙看看有问题吗，nk细胞

小芙fu

目前看细胞状态还算正常，可以继续观察

4 回答213 围观

问KGN细胞求助

dxy_75gr498r

细胞老化脱落下来的杂质培养基也有一定原因血清浓度过大，摇匀再添加

4 回答251 围观

问免疫荧光需要过氧化氢吗

小芙fu

免疫荧光一般不需要过度氧化氧化

5 回答1199 围观

问请教各位，我打算把db/db小鼠分为OGTT前和OGTT后两组做代谢组学，同时添加野生型对照

huarenqiang5

你这差距比较大，对实验结果影响比较大。

3 回答307 围观

问求助！大鼠腹腔注射水合氯醛后4天，接连死亡，为什么啊

沫子大大

可以降低浓度，我一般用5％进行麻醉，其次注射时可以进行回抽看看，不要刺破脏器。

4 回答1863 围观

问系膜细胞增生性肾炎可以用小鼠造模吗？

烧伤科常医生

小鼠造模比较困难，成功率低，成本高，很难达到实验实用要求

3 回答311 围观

问如何进行高量子核酸测序？

烧伤科常医生

有两种方法：Sanger测序和高通量测序。Sanger测序是一种传统的测序方法，它基于DNA聚合酶的作用，通过逐步合成DNA链来确定核酸序列。这种方法的优点是准确性高，但速度较慢，只能测定较短的DNA序列。高通量测序则是一种新兴的测序技术，它利用高通量测序仪器，可以同时测定数百万个DNA分子的序列。这种方法的优点是速度快，可以测定大量的DNA序列，但准确性相对较低。

3 回答239 围观

问细胞培养过程中，直径异常变大，与什么因素有关？

烧伤科常医生

我考虑是细胞水肿凋亡的可能性比较大

4 回答1658 围观

问细胞状态很好，传代后状态变差，有可能是什么原因

dxy_75gr498r

细胞自身原因，细胞衰老技术员操作问题血清问题，内毒素<10% 参数，也会影响细胞传代效果。总结:实验要求不同，各项参数要求不同，所以结果也不同，因人而异，达到想要结果就OK。

6 回答1017 围观

问样品提蛋白之前的脱色脱脂方法

sswei

残留丙酮可以破坏蛋白表面的水化膜,降低蛋白质水溶液的介电常数,从而沉淀蛋白，影响蛋白提取，所以需要去除。

3 回答768 围观

问共聚焦小皿固定以后细胞用pbs洗容易飘，有没有好一点的解决办法,2细胞本身转染了带mcherry的慢病毒，两个靶蛋白共定位的话选

huarenqiang5

建议爬片或者共聚焦皿用多聚赖氨酸和层粘连蛋白进行预处理。

3 回答1050 围观

问染核蛋白的时候荧光全在胞浆里，核蛋白染不出来，但是之前染的时候荧光是在胞核里的。请问这是什么原因，如何改进

skyye

Triton X-100通透的时间和浓度是多少呢？可以适当提高浓度和延长通透时间

4 回答669 围观

问观察切片免疫荧光时，正置荧光显微镜与倒置荧光显微镜该如何选择？

烧伤科常医生

观察切片的时候正置和倒置的都可以，观察细胞培养皿的时候一般用倒置的

5 回答1972 围观

问如何用image j测量一张照片中红色和绿色分别所占面积的百分比

sswei

面积测量的Workflow很简单，只需要两步：1、选出感兴趣的区域（ROI）——即图像分割2、Measure面积测量的本质其实就是图像的分割，图像分割的好坏直接决定了结果的好坏。区域的框选又可以分为三种类型：1、自动框选（Threshold、Analyze Particles、Color Threshold）2、半自动框选（魔法棒工具、Trainable Weka Segmentation）3、手

2 回答1928 围观

问关于car表达的检测

huarenqiang5

这种情况不能用anti-mouseF(ab)'2来检测 car的表达。

3 回答652 围观

问ggplot画图

sswei

软件功能设置错误，提示没有star compare means这个功能，需要重新设置。

2 回答320 围观

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