实验问答

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科研学霸天团，48小时有问必答

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问可以用Elisa试剂盒测植物的酶活吗

土井挞克树

可以的，elisa可以测植物酶活。

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问质粒提取浓度只有50ng/ul可以用于转染吗？

土井挞克树

可以的，如果效率不高可以少量多次的转染

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问请问0.5%中性品红是什么？

土井挞克树

中性红，英文名称为Neutral Red，CAS号为553-24-2，分子式为C15H17ClN4，分子量为288.7753。可以用作酸碱指示剂，变色范围pH值6.8(红)～8.0(橙黄)；还用作生物染色剂等。组织或细胞核中的核酸、溶酶体(lysome)、硫酸粘多糖类、肥大细胞特殊颗粒等呈酸性。本中性红染色液呈酸性，适合用于固定的组织或细胞的染色，细胞内的酸性物质可被该染色液染成红色。本产品常用于

3 回答1838 围观

问如何避免qpcr阴性的污染

土井挞克树

每天要对这些区室进行清洁消毒，并紫外照射，特别是当阳性对照溅撒，环境检测阳性或者仪器污染时，严格按照消毒程序对区室消毒，并验证消毒效果。操作过程中避免手套接触可能被污染的地方，阳性对照最后加入，加后要特别注意枪头不要蹭到其他反应孔。

3 回答832 围观

问菌液提蛋白也是用BCA法测蛋白浓度吗？

麻黄连翘赤小豆

可以的，测蛋白浓度就可以用BCA法，或者直接用蛋白定量仪

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问WB，PVDF膜显影呈磨砂，颗粒状

loveliufudan

当在Western Blot显影后，PVDF膜呈现完全白色并具有颗粒感时，可能存在以下原因之一： 1. 过度曝光：过度曝光会导致所有区域的蛋白条带变得非常明亮，甚至超出线性范围。这可能会导致整个膜呈现一片白色。尝试减少显影时间或降低显影剂的浓度以避免过度曝光。 2. 背景信号过高：可能存在较高的非特异性背景信号。这可能是由于抗体结合不特异性的蛋白或试剂中存在的污染物引起的。确保使用高质量的抗体，并

3 回答1343 围观

问WB曝光的时候只有marker条带，是怎么回事，其他的蛋白都条带一点没有，重做一遍结果一样，是什么原因？

loveliufudan

当在Western Blot实验中只观察到marker条带而没有其他蛋白条带时，可能存在以下原因： 1. 样品加载量不足：确保您在加载样品时使用足够的蛋白量。如果加载量过低，可能导致蛋白条带无法被检测到。尝试增加加载量以获得更明显的蛋白条带。 2. 蛋白转移问题：确认蛋白成功转移到膜上。检查转膜的效率，确保蛋白在电泳过程中正确地转移到膜上。您可以使用Ponceau S染色或其他蛋白质染色方法来验证

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问0.1M，pH为7.4的PBS的配方？

loveliufudan

PBS（磷酸盐缓冲盐水）的常用配方是以0.1 M浓度的磷酸盐和0.15 M浓度的氯化钠制备，pH值调整至7.4。下面是一种常见的PBS配方： 1. 准备0.1 M磷酸盐缓冲液（pH 7.4）： • Na2HPO4 (二硫酸钠) 7.21 g • NaH2PO4·H2O (磷酸氢二钠) 1.15 g将上述两种化合物分别溶解在适量的去离子水中，然后混合调整至pH 7.4。请注意，调整pH时可以使用稀盐

3 回答19445 围观

问加入loading buffer后再重新蛋白定量影响有多大。

麻黄连翘赤小豆

重新蛋白定量肯定不准，且没有必要，溴酚蓝是一种常用的电泳指示染料，蛋白定量一般在加loading buffer之前

3 回答572 围观

问Tricine-SDS PAGE三层胶的配方及注意事项

loveliufudan

以下是Tricine-SDS PAGE三层胶的配方和注意事项： 1. 垂直电泳缓冲液（上缓冲液和下缓冲液）： • 上缓冲液（Anode Buffer）：25 mM Tris，192 mM glycine，0.1%（w/v）SDS，pH 8.3。 • 下缓冲液（Cathode Buffer）：50 mM Tris，384 mM glycine，0.1%（w/v）SDS，pH 8.3。 2. 聚丙烯酰

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问AAPH和ABTS原理

loveliufudan

原理如下： 1. AAPH：AAPH是一种自由基产生剂，它通过热解产生自由基，主要是氧自由基（ROO•）。在抗氧化实验中，AAPH会引发氧自由基的产生，这些自由基可以与抗氧化物质反应并被消耗。测定抗氧化能力时，添加被测试样品到含有AAPH的溶液中，然后测量在一定时间内自由基的消耗程度。抗氧化能力较强的样品会有效地消耗AAPH引发的自由基，导致自由基的减少。 2. ABTS：ABTS是一种人工合成的

3 回答11464 围观

问如何设计Fish探针

土井挞克树

fish探针设计方法：1.FISH使用的探针序列来源于基因组或BAC(细菌人工染色体)DNA，包含许多重复序列。串联重复序列(Tandemrepeat)，如存在于着丝粒的α卫星DNA(SatelliteDNA)；散在重复序列(Interspersedrepeat)，如Alu家族。2.探针中的这些重复序列，在与基因组杂交时易产生非特异信号3.人类Cot-1DNAx是在杂交中常用来封闭及去除重复序列的

3 回答5825 围观

问为什么稳转Gaussia luciferase的细胞系检测不到RLU？

土井挞克树

可能是转染后存在降解，一般降解发生的比较快，降解后就检测不到rlu了

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问请教酵母转化，醋酸锂转化法相关问题

土井挞克树

以下为酵母醋酸锂转化法的步骤：l.于5mlYPD液体培养基中接种酿酒酵母，300C下200rpm过夜振荡培养。2.计数过夜培养的细胞密度，以5x106个／ml的最终细胞密度接种于50mlYPD培养液。3.置300C条件下200rpm振荡培养至细胞浓度为2x107个细胞_Jml，通常须要3．5小时，该培养物的细胞足够约可用于l0次醋酸锂转化。4.离心，添加醋酸锂

2 回答2462 围观

问IPTG诱导大肠杆菌实验中，大肠杆菌培养多久可加IPTG进行诱导？

Eule科研顺利

摇到OD=0.6-0.8之间加入IPTG

4 回答5899 围观

问GC-MS前处理是不是必须要冻干研磨成粉才可以提取代谢物？

土井挞克树

也可以不冻干直接用匀浆提取，但是相对来说准确度不如冻干样品

3 回答563 围观

问双酶切验证成功，但测序结果显示空载怎么回事？

dxy_mqg1dtg8

是不是两个酶切位点距离太近，或者是载体上其他地方还有这两个酶切位点

4 回答1836 围观

问GST pull-down 对照试验如何设计？

土井挞克树

一般对照都是采用gst成分保留在融合蛋白上，然后用gst结合在谷胱甘肽琼脂糖作为对照实验

3 回答941 围观

问荧光微球免疫层析试纸条（湿法）只有c线

云淡风轻2023

请问你解决了吗这个问题，我做的是纳米酶标记，也是没有T线，就好像没画T线一样没有一点你是用的夹心法还是竞争法啊

5 回答737 围观

问科研小白，请教各位前辈指教：PBMC培养48h后流式检测T细胞凋亡发现细胞凋亡的很多。

dxy_mxfl1wp9

博主，请问现在有找到什么好方法分PBMC里面的T细胞吗，我最近做的实验图和你的好像，很多死细胞，背景特别不干净，T细胞也很少

3 回答549 围观

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