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问
审稿人说细菌鉴定需要用1541R/27F引物?
huarenqiang5
这个你就必须按照审稿人的要求做才能通过审核。建议用1541R/27F引物进行细胞鉴定。
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问
栅藻 判别死活 SYBR green I和PI共同染色可以么
huarenqiang5
可以,栅藻可以判别死活SYBR gree I和PI共同染色。
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问
ChIP IP时需要定量吗?
huarenqiang5
是的,ChIP IP时需要进行定量。
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问
这提取的rna还能用吗,最下面条带是啥呀,为啥那么亮?第二张图为什么marker条带越大越不亮?
dxy_mqg1dtg8
RNA从上到下三条带应该为28S,18S,5S,5S这么亮很可能是RNA降解了。
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问
原代干细胞的提取比如dpsc其它类型也可
土井挞克树
酶消化法一般提取率相对高一些,但是弊端是对实验条件要求较高,容易造成细胞破裂
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问
构建的稳定细胞系被污染了,有啥补救措施吗?谢谢啦
loveliufudan
以下是一些建议来补救这种情况: 1. 检查实验室环境:仔细检查实验室环境,包括培养室、材料和试剂的存储区域,以确定是否存在潜在的污染源。确保实验室环境的清洁和无菌状态。 2. 检查操作流程:回顾你的实验操作流程,特别是与细胞处理相关的步骤。确认是否有可能存在污染的操作,如培养皿、培养液、工具等。确保在操作中严格遵守无菌操作规范。 3. 更换细胞培养物:考虑更换新的细胞培养物,包括培养基、补充物和抗
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问
用Epiquik试剂盒提取组蛋白,分装好之后-80保存,第二天跑胶,有时候能跑出条带有时候没有,在同一块胶上有时候也是这个情况
土井挞克树
比较细可能是上样量不同的原因,调整上样量会改善
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问
H9C2心肌细胞培养问题
土井挞克树
现在的细胞密度过小,建议增大密度,目前看来不需要重新培养,可以再观察看看
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问
为什么分离培养骨髓间充质干细胞第一代细胞不生长,长的很稀很慢,怎么提取能加大密度,去除杂细胞呢?
loveliufudan
有几个可能的原因以及相应的解决方法: 1. 初始细胞密度不足:确保在分离BM-MSCs时使用足够数量的起始骨髓细胞。增加初始细胞密度有助于提高细胞生长速率。可以尝试使用更多的骨髓细胞或使用较小的培养表面积来增加细胞密度。 2. 细胞营养物质不足:提供足够的培养基和营养物质对细胞的生长非常重要。确保培养基配方正确,包含适当的营养物质,如培养基、血清、生长因子等。 3. 培养条件不适宜:BM-MSCs
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问
pcr扩增产物出现杂带怎么办?
土井挞克树
引物设计不合理 引物是PCR扩增反应中的重要组成部分,引物的选择和设计对PCR扩增的特异性和准确性有很大的影响。如果引物的设计不合理,可能会导致扩增产物出现杂带。例如,引物长度过短、引物的序列重复、引物的序列含有多个GC或AT碱基等都可能导致PCR扩增产物出现杂带。 解决方法:重新设计引物,确保引物的长度适当、序列不重复、GC含量和AT含量适中,并使用专业的引物设计软件进行设计。 模板DNA
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问
投稿时该如何选择刊物呢,价格都是多少呢
土井挞克树
首先要看你的文章主体方向,paper和review选取的杂志肯定有所差异,另外要看创新度和完整度,创新度好的可以考虑sci或者北大核心之类的高刊,价格一般几千元不等
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问
梅雨季节,怎么防止支原体污染?
loveliufudan
以下是一些防止支原体污染的常用方法: 1. 严格的无菌操作:在实验室中进行严格的无菌操作,包括使用无菌技术和消毒实验台、操作器具和培养皿。确保培养物和培养液都不受外界环境的污染。 2. 经常更换培养基:定期更换培养基可以减少细菌和支原体的增殖。培养基中添加适量的抗生素,如青霉素和链霉素,可以预防细菌和支原体的污染。 3. 定期检测和筛查:使用特定的检测方法,如聚合酶链式反应(PCR)或荧光染色等,
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问
您好,想请问为什么有时候曝光出的蛋白条带会出现缺孔呢?
土井挞克树
可能是曝光的时间过短或者曝光强度过大,建议调整
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问
关于流式细胞术补偿调节问题
静心观照
1、需要设置单染管,但通常是对照组设置单染管。2、可以使用PBS稀释细胞悬液;也可以接种的时候适当增加细胞接种密度,上机的时候使用低速跑。3、未染色的管是双阴管,两种染料都不染,此管主要用来圈门,确定大部分细胞的位置;通常也是对照组设双阴管。4、FSC-SSC,调节的原则是上下左右都不压线,如果细胞比较小,可以选择不同的模式,适当放大信号,细胞分群就会比较明显了。6、个人使用过Biolegend这
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问
细胞染色二抗染30分钟能染出来吗?
土井挞克树
一般来说二抗30-40min就可以染出来了
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问
MTT测试细胞增值抑制率
土井挞克树
药物浓度是可以的,可以考虑调整一下细胞密度。降低一下细胞密度
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问
EvansBlue是一种非膜透性染料,只有细胞膜受损的时候才能透过膜进入细胞
静心观照
伊文斯兰,常用于检测细胞膜的完整性和细胞是否存活。活细胞因有外排功能而无法被伊文斯兰染成蓝色,而死细胞会被染成淡蓝色。因此可以通过此方法在显微镜下区分死细胞与活细胞,但无法区分死亡与坏死。
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问
求助——实验设计是否合理
静心观照
其实,再设一个模型+抑制剂组,会更好。药物组与它相比无差异,说明药物与抑制剂作用相当。
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问
需要在大肠杆菌中构建融合蛋白表达系统,并将目的蛋白分泌至培养基中,应该如何设计基因表达线路?
dxy_mqg1dtg8
在大肠杆菌中构建融合蛋白表达系统可以采用以下基本步骤:1. 选择适当的载体。载体需要包括启动子、转录终止子、选择标记等元件。常用的载体有pET、pBAD、pGEX等。2. 将目的蛋白基因与载体连接。可以使用PCR扩增目的蛋白基因,然后将其与载体连接。连接方法可以采用限制性内切酶切割、Ligase连接等方法。3. 构建融合蛋白。可以将目的蛋白基因与表达载体中的某个蛋白基因连接,从而构建融合蛋白。4.
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问
求问大佬NLRP3相关通路的wb步骤
麻黄连翘赤小豆
NLRP3和Caspase 两个条带显示蛋白有降解,其他蛋白还好,蛋白降解一个是冻融次数多,还有就是保存时间过长,新鲜组织的蛋白一般降解不多,可以重新做后两个蛋白。前面三个蛋白如果不稳定还是看是不是上样时样品不均一,没有摇匀等问题
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