实验问答22,052,602 科研人在看

科研学霸天团，48小时有问必答

问如何知道细胞培养液被污染了，下一步怎么办？

loveliufudan

要确定细胞培养液是否被污染，可以注意以下几个指标和观察： 1. 观察培养基外观：检查培养基是否呈现异常颜色、浑浊度或悬浮物。任何异常变化都可能是细胞培养液被污染的迹象。 2. 观察细胞形态：观察培养的细胞是否显示异常形态，如变形、聚集、不规则的细胞形状等。这些变化可能是污染导致的。 3. 观察细胞生长率：如果细胞生长缓慢、停滞或减少，可能是细胞培养液受到了污染的迹象。 4. 进行细菌培养：将一小部

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问为什么要热灭活血清？

loveliufudan

热灭活血清的主要原因： 1. 消除病毒和微生物：血清中可能存在潜在的病毒、细菌或其他微生物。通过热处理，可以有效杀灭这些病原体，从而降低血清的感染风险。这对于细胞培养和实验动物的健康非常重要。 2. 保留其他生物活性成分：血清中含有许多对细胞生长和功能非常重要的生物活性成分，如生长因子、细胞黏附分子和免疫调节因子等。热灭活血清的目的是在杀灭病原体的同时尽量保留这些生物活性成分的功能。需要注意的是，

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问WB转膜出现这种圆点是怎么回事啊，感觉和转膜夹上的一样大小

loveliufudan

可能是转膜夹有缺陷或损坏导致的。检查转膜夹是否完整，并尽量使用新的、无损坏的转膜夹。

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问用胰酶消化贴壁细胞，发现很难消化下来，该怎么办？

sswei

一、trypsin本身，胰酶没有在冰箱中放置。或者没有加入EDTA会影响其消化效果的。二、增加消化时间，提高trypsin 浓度。undefined,undefined的trypsin本身对细胞伤害不大。至少对cho细胞，暴露在undefinedtrypsin溶液中，近一个小时，细胞活性没有显著下降的。所以，可以提高trypsin浓度为undefined,或者消化时间延长些。三、小tricks，消化的时候，轻轻拍打方形瓶底部，或者在37摄氏度放置几分钟

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问请问黑胶虫污染的问题如何解决呢？

loveliufudan

1. 确认污染：首先，通过使用合适的方法进行黑胶虫检测，如PCR、DNA染色、培养基检测等，确认细胞确实受到黑胶虫污染。 2. 隔离受污染细胞：将受污染的细胞与其他无污染的细胞分开，避免进一步传播。 3. 抗生素处理：使用适当的抗生素来清除黑胶虫污染。常用的抗生素包括环丙沙星、多西环素等，可以按照厂家建议的剂量和处理时间进行应用。在使用抗生素之前，可以通过培养基预处理、酸化或冻融处理等方法增强抗

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问干预CCK8检测细胞增殖

然吉儿

一般如果前期造模采用无或低血清，那么CCK8最好也用相同条件，这样保持实验条件前后一致性

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问细胞中发现黑胶虫污染怎么办？左氧氟沙星该怎么用？

烧伤科常医生

处理方法可以换优质胎牛血清，可以用伯胺奎、磺胺、四环素、贝尼尔、庆大霉素进行洗涤。不建议使用左氧氟沙星洗涤。

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问测定体外细胞吞噬能力的方法有哪些？

loveliufudan

以下是其中一些常用的方法： 1. 吞噬试剂：利用特定的吞噬试剂，如荧光染料，将其与被吞噬的颗粒（如细菌、微珠等）结合。这些试剂在细胞内被降解后，会发出荧光信号，从而表明细胞吞噬了目标颗粒。可以通过荧光显微镜或流式细胞术来检测和计量吞噬事件。 2. 色素染色：使用特定的染料，如吡罗红、尼格罗蓝等，将细胞和目标颗粒一起染色。通过显微镜观察和计数染色的细胞和目标颗粒，可以评估细胞吞噬能力。 3. 放射性

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问请问检测细胞凋亡时细胞能用胰酶消化吗？直接刮下来会有影响吗？

loveliufudan

在细胞凋亡检测中，保留细胞的完整性非常重要，以便准确测量细胞凋亡的标志物。直接使用胰酶消化细胞会导致细胞的形态和结构破坏，可能影响凋亡信号的检测。相反，常见的细胞凋亡检测方法包括使用特定的染料（如荧光染料）或抗体来标记凋亡标志物，如DNA断裂和磷脂外翻。这些方法通常在细胞处于附着状态下进行，而不需要胰酶解离。

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问细胞里面有黑点点，状态好的时候不太明显，状态不好的时候很明显，是黑胶虫吗？

loveliufudan

黑胶虫可能是细胞中出现黑点的一个可能原因之一，但不能仅凭外观判断是否为黑胶虫污染。其他因素也可能导致细胞中出现黑点，如细胞碎片、凝固物或其他细胞内部的结构。为了确认是否为黑胶虫污染，需要进行相应的检测。

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问这是啥菌啊…已经扔了，只想知道咋整…

loveliufudan

很明显的霉菌污染，建议实行以下处理： 1. 隔离受污染的细胞：如果发现细胞培养物受到霉菌污染，首先应该将受污染的细胞培养物与其他无污染的培养物隔离开，以防止进一步传播。 2. 清除受污染的培养物：将受污染的培养物丢弃，避免与其他细胞接触。使用合适的消毒剂彻底清洁和消毒受污染的培养皿、培养槽和其他相关实验器具。 3. 消毒实验室设备和工作区域：彻底清洁和消毒受污染的实验室设备、工作台、试剂瓶等，以防

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问①细胞培养过程如何检测细胞老化？ ②细胞发生支原体污染时有无好的办法挽救？ ③3D细胞培养的优缺点。

loveliufudan

① 检测细胞老化的方法有多种。以下是几种常见的方法： • 检测酶活性：测定细胞中特定酶的活性，如β-galactosidase活性，是一种常用的细胞老化指标。老化细胞通常会表现出增强的β-galactosidase活性。 • 检测端粒长度：通过测量端粒长度来评估细胞的老化程度。细胞老化会导致端粒缩短。 • 检测染色体异常：老化细胞通常会出现染色体异常，如染色体断裂、融合或缺失等。 • 检测细胞周期

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问细胞培养基调节pH值，到底是以空气中的为准，还是以5%二氧化碳中平衡后为准？

loveliufudan

在细胞培养中，维持适当的pH值对于细胞生长和功能至关重要。通常情况下，细胞培养基的pH值应以平衡了5%二氧化碳（CO2）的环境为准。细胞培养基中的CO2与空气中的CO2浓度不同。空气中的CO2浓度约为0.04%，而细胞培养基通常在培养箱中通过添加5% CO2来维持适当的pH值。这是因为CO2在水中会形成碳酸，可以通过平衡CO2浓度来调节培养基的pH值。细胞培养箱会提供一个稳定的环境，其中包含5%

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问想问一下细胞培养所用的培养液有哪些，各有什么区别呢？

loveliufudan

细胞培养中使用的培养液种类很多，每种培养液都有其特定的配方和用途。以下是几种常见的细胞培养液及其主要特点和应用： 1. DMEM（Dulbecco’s Modified Eagle’s Medium）：DMEM是一种基础的培养液，含有丰富的营养物质，如氨基酸、糖类和维生素等。它适用于多种细胞类型的培养，包括肺、肾、肝和成纤维细胞等。 2. RPMI-1640：RPMI-1640是一种专门用于淋巴细

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问人体鼻咽癌细胞（C666-1)怎么样才能让它贴壁更好，消化时间大概在多少，才能让细胞不聚团

烧伤科常医生

建议使用一次性培养瓶进口的最好，可以让贴壁效果更好，再就选择培养基血清培养基能使细胞更好的贴壁。至于怎么让细胞不聚团：可以低密度传代，选择适当的离心转速和时间离心聚团细胞。

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问细胞培养过程中的小黑点

烧伤科常医生

有可能是黑胶虫，细胞碎片，凋亡小体，血清中的沉淀或者是支原体的污染。

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问细胞培养时，细胞背景里的黑点是什么？黑胶虫还是啥？如何处理？

sswei

体外培养的动物细胞很容易受到培养环境因素的影响，例如营养成分的改变、氧的供给、毒素、细胞代谢产物的积累、pH、剪切力、细胞密度及微生物污染等。这些环境的改变都有可能诱发细胞的凋亡，从而产生很多分泌的凋亡小体。凋亡小体大多游离在培养基中，但也有一些会通过暴露的核酸彼此之间相互黏连，从而形成一个棕色的凋亡小体团块，没有细胞光泽。建议：细胞培养的过程中一定要控制细胞传代的时间，不能让细胞“长过”；不要

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问mtt法细胞活性检测？

loveliufudan

如果在MTT染色后弃掉培养基，并让培养板晾干2-3天后再加DMSO溶解产物测OD值，可能会影响结果。首先，形式氢氧化物（Formazan）晾干后可能会难以用DMSO完全溶解，这可能会导致您的OD读数偏低，无法准确反映活细胞数量。其次，长时间晾干可能导致形式氢氧化物的降解。虽然形式氢氧化物相对稳定，但在暴露于空气和光线下的情况下，它可能会部分降解，这同样会使得OD读数偏低。因此，为了获得准确的实验结

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问MTT测OD是用多少nm波长检测？

行而上学不行

实验中波长的选择主要依赖于你要测的样品。样品在不同的波长下，对光的吸收值也不同，但都有一个吸收峰，一般选择吸收峰时的波长进行实验。比如同样是MTT法做细胞毒性实验，就有使用490nm和570nm两种波长选择，如果使用了DMSO作为试剂，在溶解后呈紫（红）色，在490nm有最大吸收值；而对于SDS和酸化异丙醇，则选用570nm（655nm作为参考波长）。

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问MTT孵育完之后弃掉上清，4天后再加DMSO测OD可以吗？

sswei

在加入MTT后,一般到4小时即可得到比较好的结果,但是时间过得太长之后再进行测定,会对结果产生误差,所以不要考虑时间过得太长再进行测定.

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