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        用胰酶消化贴壁细胞,发现很难消化下来,该怎么办?

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        罐头小鱼干


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        4 个回答

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        dxyc42u

        有帮助

        排除细胞状态不好的原因,可以考虑换下胰酶试试看

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        sswei

        有帮助

        一、trypsin本身,胰酶没有在冰箱中放置。或者没有加入EDTA会影响其消化效果的。

        二、增加消化时间,提高trypsin 浓度。undefined,undefined的trypsin本身对细胞伤害不大。至少对cho细胞,暴露在undefinedtrypsin溶液中,近一个小时,细胞活性没有显著下降的。所以,可以提高trypsin浓度为undefined,或者消化时间延长些。

        三、小tricks,消化的时候,轻轻拍打方形瓶底部,或者在37摄氏度放置几分钟,都可以提高消化效果。

        另外,贴壁细胞不好消化,本身是好事。说明细胞长得很壮。下次传代的时候,可以少留一些。覆盖率长到90%消化就可以,不一定非要等到长满。

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        土井挞克树

        有帮助

        难消化的话可以增加胰酶的浓度,或在胰酶内加入edta辅助消化

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        loveliufudan

        有帮助

        有几种解决方法:

        1. 增加胰酶浓度:尝试增加胰酶的浓度来增强消化能力。可以逐渐增加胰酶的浓度,然后进行适当的消化时间,以观察是否可以更有效地消化贴壁细胞。

        2. 延长消化时间:如果胰酶的浓度已经足够高,可以尝试延长消化的时间。有些细胞类型的表面附着物质可能较难消化,需要更长的时间来获得较好的消化效果。试验过程中要注意不要超过细胞的最大耐受时间。

        3. 添加细胞分散剂:如果胰酶仍然无法有效消化贴壁细胞,可以尝试添加适量的细胞分散剂,如Trypsin-EDTA(胰蛋白酶-EDTA)或Accutase等。这些分散剂具有更强的细胞分散能力,有助于将贴壁细胞从培养基底上分离下来。

        4. 优化细胞处理条件:除了胰酶消化条件的调整,还可以考虑优化其他细胞处理条件,如细胞培养基的配方、温度、pH值等。某些细胞可能对特定条件更敏感,对消化的效果也会有影响。

        5. 尝试其他方法:如果使用胰酶或细胞分散剂仍然无法有效消化贴壁细胞,可以尝试其他细胞分离或解聚的方法,如机械刮取、离心沉淀、胶体溶解酶等。这些方法可能对特定细胞类型或实验条件更适用。

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