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科研学霸天团，48小时有问必答

问免疫磁珠分离细胞，是否要经过封闭？

西柚味的芋圆

一般不封闭吧，我是严格按照说明书的步骤来的，用的美天妮的磁珠分选，但是分选成功后，检测纯度的时候可以封闭

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问磁珠分选和流式分选的问题

dxy_29k93ve4

磁珠分选一般是细胞数比较多，如果流式分选时间会很长，磁珠分选可以较短时间拿到比较多的细胞；流式分选会时间相对较长，同时分选过程会给液滴加电，以及如果液体打到收集管侧壁都会对细胞造成损伤，但是可以同时多标进行分选，磁珠分选就做不到

9 回答1063 围观

问磁珠分选T细胞该选什么柱子？

dxy_29k93ve4

一般根据细胞数选用的柱子，每种柱子能挂的细胞数不一样

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问分选CD4 CD8细胞之后死细胞太多了，有什么方法可以保护细胞的活性吗？

dxy_29k93ve4

分离细胞的时候可以加2% 的FBS,MACS分选的时候可以降到0.5% 给他一点营养，别让他饿着

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问免疫细胞化学检测采用SP法和SABC法的结果为什么不一致？

西柚味的芋圆

那只能重新检测一下标本，同时做俩种方法，确保所用的一抗识别同一克隆位点

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问瞬时转染目的病毒及空载病毒测OD值的问题

西柚味的芋圆

肯定不会，，检测时的激发光的波长完全不一样，所以没有干扰

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问细胞增殖检测方法除了MTT,还有哪些？

半两月光

是不是Brdu掺入法，在DNA合成时Brdu代替胸腺嘧啶掺入到DNA中，通过抗Brdu抗体检测Brdu掺入量来反应细胞增殖情况

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问如何检测人的肝脏内免疫活性细胞(调节性T细胞或自然杀伤性T细胞)的数量和功能?

西柚味的芋圆

流式的方法应该是可以的可以通过流式的方法去检测人穿刺的肝脏样本中免疫细胞的活性。先剪碎组织，用0.5mg/ml collagenase IV 消化 37℃ 30min。消化之后过滤离心，裂红。得到免疫细胞之后就可以计数。利用流式抗体，可以检测Treg和NK细胞的细胞因子如TNF-a IFN-gamma等。但是这些胞内因子的检测需要加刺激计，对细胞数量和活性都有一定的要求

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问病毒感染可以做MTT吗？

西柚味的芋圆

可以用cck8 做吖，做起来比较简单。就是加板子比较废眼睛。MTT也可以，但是没有CCk.8简单吧

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问细胞培养的前期工作准备有哪些？比如器皿的消毒处理？

东月来星

我无聊跟你说说吧，1. 离心管、头、棉球、培养瓶、玻璃容器等需要消毒处理吗？高压还是浸泡？离心管、头之内的高压灭菌即可。棉球用酒精配。培养瓶和玻璃容器可以泡酸洗涤在高压。具体酸的配方论坛里就有。配个次强酸就行。可以用好久的。注意安全就好。2、血清需要过滤吗？还是需要怎样处理？不用过滤。关于灭活论坛里看法不一，自己收收看，自己选择。3、PBS配置后需要高压吗？高压，不高压，细胞污染了咋办。4、

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问人工提取血凝块DNA，捣碎血凝块有什么好方法？

丁香实验

1.可以用纤溶酶处理, 比如tPA,2.或者直接用小的玻璃匀浆器研磨,3.很奇怪,血凝块中的血小板和红细胞是主要成份,有核细胞少的很,你如何这样提DNA, 为什么不用血液或其它组织来提

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问细胞培养中霉菌污染问题

丁香实验

1.细菌污染液体混浊,霉菌污染可看见霉苔但液体不混,所以你的细菌和霉菌同时污染处理:扔掉,以免污染其他细胞2.你说的线状生长实际上细胞已经接近死亡3.可以将培养箱用75%的酒精擦拭,并停止细胞培养,然后用紫外消毒房间

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问细胞复苏失败的原因分析

丁香实验

juventus2004认为复苏过程没有问题，是否是从液氮拿出直接放入温水，还有培养箱，二氧化碳浓度，培养基、PH值等环节。要么加高浓度FBS 15-20%，看看能否帮助贴壁，当然也需要考虑血清问题，还有确信拿来的细胞没问题。pcspc9认为首先应该怀疑冻存，实际上复苏出问题的可能非常小，因为操作简单，而且死板。1、你冻存的时候是不是消化的时间过长，这是一般人所注意不到的，即使书上也不讲这个问题，

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问如何观察细胞污染？

丁香实验

观察细胞污染首先要从培养液的外观来看，看培养液是否清亮。当然，刚刚加入培养液是看不出来的。必需经过隔夜培养或更长时间才能看出来。如果培养液变混浊，则可断定细胞污染。其次，是从显微镜下观察，因细菌很小，所以观察时眼睛盯住一个视野，你会看见细小的黑点在动，细胞是不会动的，因此，可以断定那就是细菌。以上是小可培养细胞来观察污染的一点体会，仅供参考。不过以上情况还是少见或不见好，那就表明你的细胞养的好。

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问细胞胞质疏松，状态不好，养不起来怎么办?

丁香实验

——解决办法1：一般情况下，从血清下手就行，要么换好血清，要么提高血清浓度，血清浓度提高到 15%～20% 培养 48 h，换成正常 10% 的浓度，用高浓度的血清培养时间过长对细胞有毒性。——解决办法2：血清下手之后可以同时采取提高细胞密度的方法，从培养瓶换到六孔板，12 孔板等，细胞密度大，细胞分泌的细胞因子多，肿瘤细胞通过旁分泌途径促进细胞生长。——预防办法：细胞胞质疏松，老化的原因在于细胞

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问细胞免疫荧光探讨

旅途中的搬运工

我最近也在做，做了好几次甩片了，准备试试在流式管或者EP管里面固定加染色了，做完最后一步再甩片了。甩片完了在固定，细胞形态会改变，结构可能也完整

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问外周血单个核细胞（PBMC）

丁香实验

破骨细胞没诱导培养过，刚看了下资料，猜测你估计是用血液单核细胞诱导法诱导分化培养，这个就需要贴壁的单核细胞，单核细胞是半贴壁的细胞，可以只加培养液不加血清诱导因子于培养箱孵育1-2h，然后用PBS慢慢清洗去除不贴壁的淋巴细胞和其他杂细胞杂质等，这样六孔板下单核细胞纯度就高了，看了你这图片，铺板密度有点低啊，以前做过2-undefined10^6/ml铺孔PBMC分离单个核细胞，然后洗涤纯化，单核纯度很高。然后加

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问大家来谈谈95D,95C的培养心得吧

丁香实验

谢谢评论，今天36h，细胞在10cm皿和六孔板里全死了。我估计消化确实有问题，但是不知道到底是消化过度还是消化不足。同时养的A549、293T贴壁也不好。12h了，贴壁后形态还是圆的，贴壁不稳当

3 回答889 围观

问CCK8实验求助…

丁香实验

历经三个月，终于测出了满意的结果，细胞量一定不能多，我最后用的5000/孔，其次，染毒加血清很重要，之前一直用的无血清培养基配药，所以实验组有时会高于对照组

3 回答1989 围观

问最近细胞总是复苏失败，是什么原因？

shijunwen2007

细胞冻存和复苏的原则是慢冻快融，只要按着这个标准去做，一般细胞都不会受太大的损伤。你说细胞细胞在冻存后复苏一开始成活率还好，最近复苏不成功，考虑是冻存后保存的原因，是-80度还是液氮保？-80度保存是否由于经常开启导致温度经常波动？温度的经常性波动致使冻存细胞受到损伤，所以复苏不成功。

10 回答8686 围观

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