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科研学霸天团，48小时有问必答

问大鼠原代施万细胞分离培养如何进行？

Eason老歌迷

目前最简便、快捷分离纯化施万细胞的方法是差速贴壁法，即根据不同细胞在培养器皿上贴壁速度的差异，去除成纤维等污染细胞，以获得高纯度施万细胞。细胞经0.125%胰蛋白酶消化后，制成单细胞悬液，置于未覆层的培养皿中，37℃,5%CO2孵箱中培养30min后，将未贴壁的细胞悬液转种于另－未包被的器皿中，30min后重复以上操作，最后将未贴壁细胞按照合适的密度接种在多聚赖氨酸或Laminin包被的培养器皿中

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问为啥我的内皮细胞长的好慢呢？培养基用内皮细胞专用培养基，还把血清加到了百分之十，可都十天了还是不能传代。

未来9

内皮细胞长的很慢的原因可能有：传代的细胞密度太小；换液间隔时间长；查看是否有污染；细胞消化过度。

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问您好，请问怎么hoechst染液检测？hoechst有好几种，该用后面是哪一种编号的呢？

Eason老歌迷

1.对于固定的细胞或组织:a.对于细胞或组织样品，固定后，适当洗涤去除固定剂。随后如果需要进行免疫荧光染色，则先进行免疫荧光染色，染色完毕后再按后续步骤进行 Hoechst 33342染色。如果不需要进行其它染色，则直接进行后续的Hoechst 33342 染色。 b.对于贴壁细胞或组织切片，加入少量Hoechst 33342染色液，覆盖住样品即可;对于悬浮细胞，至少加入待染色样品3倍体积的染

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问细胞加药或者换液后突然全部死亡，都裂解掉了，换液前贴壁贴的挺好的，试过别的细胞系，换过孔板，也有出现这种状况，这是为什么呢？

Keven轩

可能是你加胰酶的量过多或者浓度过大，细胞消化过度，而且吹打混匀过多导致细胞裂解。而且下次加药的时候可以从培养皿边缘加药，且不要用力将液体大下

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问最近复苏了一支新的细胞，第二天还好好的，传了一代，再过两天液体就变黄变混浊了，还有大片的细胞脱落，不知道是什么原因造成的

zhguxu2001

毫无疑问是污染如果无污染，无论如何不会混浊培养液变黄，是细菌真菌病毒等过度消耗营养物质

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问细胞培养过程中，发现贴壁细胞表面沾了很多死细胞，传代过程中一直存在怎么破？

bamboopiggy

胰酶消化一下细胞，然后等细胞贴壁后。尽早换液。一般你说的这种是细胞扎堆生长，顶上的细胞容易死

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问细胞培养中细胞逐渐死亡？状态变差

Miracle星

我们把这种称为黑胶虫及其分解复合物，是一种常见的细胞污染物。请与细胞共生，髓细胞传代而传代，通常抗生素对其无效黑胶，虫与细胞竞争性生长，对细胞生长不利，严重时导致细胞死亡，目前很多细胞存在被细菌传染污染的现象，对细胞培养及其后续实验造成影响。如果小黑点有增值的趋势，有可能是污染了，需要处理，如果小黑点没有增值趋势且不影响细胞生长，也不影响实验的话，可能是黑胶虫。也有可能是细胞碎片或血清里的沉淀析出

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问第一天Pma诱导，第二天换液时观察少数没贴壁大部分是贴壁了，第三天要做实验发现贴下去的有一半都脱落了贴壁只剩一半感觉也是

Miracle星

操作时要避光操作如果你手上这只已经传带很多的话，建议换一只新的，这是直接的方法。检查培养基是否有污染。在传代或复苏前选用包被也包被培养瓶。增加细胞贴壁性。

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问培养人干细胞过程中培养液出现小颗粒晶体是什么原因呢？如何处理？

天一湖医者

如果排除枝原体污染的话，注意一下是否因为怕污染而将细胞瓶盖拧得太紧了？CO2进入细胞瓶受阻？松一下瓶盖看看。

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问PBMC可以冻存吗？冻存方法和条件是什么呢？

未来9

可以冻存，冻存在液氮中，实验时需要就拿出来解冻后再用。PBMC的冻存条件：预先配置20%的DMSO，4度预冷。

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问肝癌细胞huh-7细胞培养有什么特别注意的嘛？一直养不好这个细胞，养着养着就黑了

bamboopiggy

这个细胞系，对血清的要求比较高，你用好点的血清养试试

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问测一氧化氮浓度选择的样品

bamboopiggy

细胞裂解液和上清都可以，但是NO，直接不好测，一般测定是一氧化氮合酶

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问细胞培养中血清沉淀对细胞有何影响？

bamboopiggy

血清沉淀问题不大，要是怕有影响，可以把沉淀离心出来，不要

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问本人培养的是Yts细胞，为什么会出现传代2-2次后出现许多细胞碎片并且状态越来越差，长得很慢（没有污染）？

未来9

细胞碎片多，生长状态不好，可能是你吹打过多或者多次吹打导致碎片，可以加大培养基血清浓度，降低离心速度养两代试试。碎片一般会离心出去

3 回答355 围观

问提取细胞RNA时，不小心将trizol试剂打翻洒在了超净工作台上，该如何处理呢

Miracle星

打翻化学试剂或器皿处理的情况不同，大致来说，1瓶中为挥发性有毒或者是有害试剂，立即打开通风设备，疏散试验人员，第2种瓶中为腐蚀性液体时立即清理掉，此处清理应根据具体情况使用物理或化学方法，比如如果有是装有汞的器皿被打破，汞珠散落在地应撒上硫粉处理。第3天中午是几或者是几无毒无害，则应把打翻的事迹清理进废液缸内，再把碎玻璃渣扫掉就差不多可以了。

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问长菌了！求解。操作没有什么问题。

Keven轩

可能是超净台的通风系统出了问题，及时换一下滤芯，同时注意无菌操作，这样看杂菌菌落这么大应该是你的操作问题

3 回答159 围观

问肿瘤细胞传代几天不长也不死。飘了一些。

我愿送他一轮明月

是不是冻存的时候状态就很差？这样就只能换液、慢慢养。

3 回答398 围观

问大家分离神经原代细胞用的消化液和方法是怎样的

Miracle星

培养基选择无血清培养基被认为是最标准最好的培养基，需要的添加剂为B27和谷氨酰胺培养出的细胞状态，均一，胶质细胞几乎不分裂，其中neurobasal是鼠培养级而-a为新生鼠培养基。切忌中途换培养基，要从一而终。

3 回答568 围观

问不同部位的细胞的分裂速度一样吗？

bamboopiggy

不一样啊，有的快，有的慢，有的长长就不长了

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问细胞种到六孔板后生长不均匀

s1223

铺板前细胞一定要涡旋混匀，混匀后缓慢加入，一定一定要慢，之后慢慢转移至培养箱，动作幅度要小，一定一定要小

4 回答1480 围观

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